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ゲンジボタル・ルシフェラーゼ反応中間体アナログ複合体のX線結晶構造解析

源氏萤火虫荧光素酶反应中间体类似物复合物的X射线晶体结构分析

基本信息

批准号：
12045269
负责人：
加藤博章
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本計画の目標は、ルシフェラーゼと反応中間体アナログ、アデニル化デヒドロルシフェリンとの複合体のX線結晶構造解析を行い、アデニル化ルシフェリンの結合様式の構造的な基盤を明らかにすることにある。そして、その結果に基づいて、さらに次の反応段階を捉えるための鍵となる新たな中間体アナログのデザインを行おうとするものである。そこで、デヒドロルシフェリンとATPをルシフェラーゼと混合して反応させた後、沈殿剤を加えて結晶化を行ったところ、ポリエチレングリコールを沈殿剤として良質の結晶を得ることができた。そこで、SPring-8のシンクロトロン放射光をX線源としてX線結晶解析を行ったところ、1.7Å分解能のX線回折強度データの収集に成功した。得られたデータとすでに解析したルシフェラーゼ-ATP複合体の立体構造モデルを初期構造として、分子置換法による構造解析を行ったところ、有意な解を見つけることができた。現在、構造モデルの精密化を行っている。デヒドロルシフェリンの結合部位は、ATPのαリン酸残基結合位置の近傍にある洞穴状のくぼみの中にあり、結合部位を構成しているアミノ酸残基は、疎水性の側鎖を有するものがほとんどであった。このことは、従来分光学的な実験から予想されてきたルシフェリン結合部位の特徴と良く一致している。しかし、ATP部分の電子密度が鮮明なことと比較してデヒドロルシフェリン部分の電子密度はぼやけており、結合したデヒドロルシフェリンは動きやすいことが示唆された。

The purpose of this project is to analyze the X-ray crystal structure of the complex of the reaction intermediate and the reaction intermediate, and to clarify the structure of the substrate of the reaction intermediate. For example, the reaction between the intermediate and the reaction product is as follows: For example, if you want to make a reservation, you can make a reservation. If you want to make a reservation, please contact us. The X-ray source and X-ray crystal analysis of SPring-8 and SPring-8 were successful in the collection of X-ray reflection intensity. The three-dimensional structure of ATP complex was analyzed by molecular substitution method. Now, the structure of the structure of the precision of the process. The binding site of ATP is located near the binding site of ATP α-amino acid residue. The binding site is composed of ATP α-amino acid residue, ATP α-amino acid residue and ATP α-amino acid residue. The characteristics of the binding sites are consistent with each other. The electron density of the ATP fraction is higher than that of the ATP fraction. The electron density of the ATP fraction is higher than that of the ATP fraction.

项目成果

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专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

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加藤博章其他文献

Lafitidine-induced increase in intracellular Ca2+ concentrations in PC12 and endothelial cells.

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期刊：
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通讯作者：
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