膜タンパク質結晶化の支援法の開発-ABCタンパク質を中心に
膜蛋白结晶支持方法的开发——以ABC蛋白为中心
基本信息
- 批准号:11169222
- 负责人:
- 金额:$ 1.66万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
- 财政年份:1999
- 资助国家:日本
- 起止时间:1999 至 2000
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
(1)ペルオキシソームのABCトランスポーターALDPとPMP70のATP結合ドメインとマルトース結合タンパク質MBPとの融合タンパク質の結晶化を行うため、ALDPとPMP70とMBPとの融合タンパク質を大腸菌にて発現させて精製し動的光散乱を用いて結晶化に対する適性を判別した。しかし、残念ながらいずれも結晶化には適さない会合体であることが判明した。そこで、大腸菌以外の発現系を用いる系の検討を始めた。(2)ラットのMDRとSUR1を昆虫細胞SF-9を用いて発現させるシステムを構築した。その結果、ウエスタンブロットで発現を確認することができた。そこで、界面活性剤の適性を調べるとともに、小スケールでの精製を試みた。(3)糖鎖構造の詳細が解明されているリンゴ銀葉病菌由来ポリガラクチュロナーゼを用いて糖鎖の構造が結晶化に及ぼす影響の把握を試みた。その結果、糖鎖構造の存在は問題とならないが、構造の多様性がある場合には結晶化の障害となることが実験的に確認できた。すなわち、糖鎖構造に多様性がある場合は、動的光散乱による分子サイズの分布が多分散の様相を示し、結晶化を行っても結晶が得られないことがわかった。一方、結晶化できた、修飾糖鎖構造が単純な酵素は、X線結晶構造解析を行うことにおり、その三次元構造を明らかにすることができた。この結晶は、SPring-8のシンクロトロン放射光X線を用いた場合0.96Åを越える分解能を有しており、ARP/wARPプログラムを用いることにより、自動的に分子モデルを構築することができた。
(1)ALDP and PMP 70 are used to determine the suitability of ATP binding agents for the crystallization of MBP fusion agents. It's not a good idea. It's a good idea. The development system of bacteria other than Escherichia coli is used in the study. (2)A new method for the construction of insect cells SF-9 was proposed. The result of the test was confirmed. For example, the compatibility of the surfactant can be adjusted by adjusting the temperature of the surfactant and refining it. (3)The structure of the sugar chain is explained in detail, and the origin of the silver leaf pathogen is studied. The results show that the existence of sugar lock structure is a problem, and the diversity of structure is a problem. The structure of sugar chain is multi-phase, and the distribution of molecular structure is multi-phase. The crystallization is multi-phase. A square, crystallization, modified sugar lock structure, pure enzyme, X-ray crystal structure analysis, three-dimensional structure, bright and bright The crystal, SPring-8, and its components emit X-ray radiation. When 0.96 ° C, the decomposition energy is reduced. When ARP/WARP is reduced, the molecular structure is reduced automatically.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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- 发表时间:
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- 通讯作者:
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