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膜タンパク質結晶化の支援法の開発-ABCタンパク質を中心に

膜蛋白结晶支持方法的开发——以ABC蛋白为中心

基本信息

批准号：
11169222
负责人：
加藤博章
金额：
$ 1.66万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)ペルオキシソームのABCトランスポーターALDPとPMP70のATP結合ドメインとマルトース結合タンパク質MBPとの融合タンパク質の結晶化を行うため、ALDPとPMP70とMBPとの融合タンパク質を大腸菌にて発現させて精製し動的光散乱を用いて結晶化に対する適性を判別した。しかし、残念ながらいずれも結晶化には適さない会合体であることが判明した。そこで、大腸菌以外の発現系を用いる系の検討を始めた。(2)ラットのMDRとSUR1を昆虫細胞SF-9を用いて発現させるシステムを構築した。その結果、ウエスタンブロットで発現を確認することができた。そこで、界面活性剤の適性を調べるとともに、小スケールでの精製を試みた。(3)糖鎖構造の詳細が解明されているリンゴ銀葉病菌由来ポリガラクチュロナーゼを用いて糖鎖の構造が結晶化に及ぼす影響の把握を試みた。その結果、糖鎖構造の存在は問題とならないが、構造の多様性がある場合には結晶化の障害となることが実験的に確認できた。すなわち、糖鎖構造に多様性がある場合は、動的光散乱による分子サイズの分布が多分散の様相を示し、結晶化を行っても結晶が得られないことがわかった。一方、結晶化できた、修飾糖鎖構造が単純な酵素は、X線結晶構造解析を行うことにおり、その三次元構造を明らかにすることができた。この結晶は、SPring-8のシンクロトロン放射光X線を用いた場合0.96Åを越える分解能を有しており、ARP/wARPプログラムを用いることにより、自動的に分子モデルを構築することができた。

(1) in this paper, we use the method of ALDP PMP70 ATP, the combination of ATP and MBP, the crystallization of MBP fusion, the crystallization of PMP70, the fusion of PMP70, the fusion of aseptic bacteria, the detection of astigmatism, and the identification of astigmatism. In the process of crystallization, the combination of the system will determine the accuracy of the diagnosis. In addition to mildew, other than the fungus, the system is used in the first place. (2) the SF-9 of the insect cell SF-9 MDR the insect cell. The results show that you have confirmed that you are suffering from a bad situation. The interface activity is sensitive, and the interface activity is sensitive. (3) to understand the origin of pathogens, to understand the origin of pathogens, to crystallize the results and to test the pathogens. The results show that there are some problems in the production of sugar. There are some problems in the production of sugar, and there are problems in the production of sugar. The combination of poly-phenylethylamine and glucose, the distribution of light-dispersive molecules and the characterization of polydisperse phase were obtained by crystallization and crystallization. On the one hand, crystallize the crystal, modify the sugar to make the enzyme enzyme, X-ray crystal to analyze the data, and make the three-dimensional analysis. The results show that the photolysis of SPring-8, ARP/wARP, ARP/wARP, and automatic molecular devices can be used for X-ray emission.

项目成果

期刊论文数量（1）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

中津亨: "構造機能の相同性とアミノ酸配列の非相同性"化学と生物. 37. 487-491 (1999)

Toru Nakatsu：“结构功能同源性和氨基酸序列非同源性”化学与生物学 37. 487-491 (1999)。

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通讯作者：
F.Yokokawa