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膜タンパク質結晶化の支援法の開発-ABCタンパク質を中心に

膜蛋白结晶支持方法的开发——以ABC蛋白为中心

基本信息

批准号：
11169222
负责人：
加藤博章
金额：
$ 1.66万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)ペルオキシソームのABCトランスポーターALDPとPMP70のATP結合ドメインとマルトース結合タンパク質MBPとの融合タンパク質の結晶化を行うため、ALDPとPMP70とMBPとの融合タンパク質を大腸菌にて発現させて精製し動的光散乱を用いて結晶化に対する適性を判別した。しかし、残念ながらいずれも結晶化には適さない会合体であることが判明した。そこで、大腸菌以外の発現系を用いる系の検討を始めた。(2)ラットのMDRとSUR1を昆虫細胞SF-9を用いて発現させるシステムを構築した。その結果、ウエスタンブロットで発現を確認することができた。そこで、界面活性剤の適性を調べるとともに、小スケールでの精製を試みた。(3)糖鎖構造の詳細が解明されているリンゴ銀葉病菌由来ポリガラクチュロナーゼを用いて糖鎖の構造が結晶化に及ぼす影響の把握を試みた。その結果、糖鎖構造の存在は問題とならないが、構造の多様性がある場合には結晶化の障害となることが実験的に確認できた。すなわち、糖鎖構造に多様性がある場合は、動的光散乱による分子サイズの分布が多分散の様相を示し、結晶化を行っても結晶が得られないことがわかった。一方、結晶化できた、修飾糖鎖構造が単純な酵素は、X線結晶構造解析を行うことにおり、その三次元構造を明らかにすることができた。この結晶は、SPring-8のシンクロトロン放射光X線を用いた場合0.96Åを越える分解能を有しており、ARP/wARPプログラムを用いることにより、自動的に分子モデルを構築することができた。

(1) ペルオキシソームのABC トランスポーターALDPとPMP70のATP binding ドメインとマルトース binding タンパクquality MBP とのfusion タンパクqualityのCrystallized を行うため, ALDP とPMP70 and MBP とのfusion タンパクquality を large intestine Bacteria are present and refined. The light scattering of the movement is judged by the crystallization of the bacteria and the suitability of the bacteria.しかし, Cannian ながらいずれも Crystallized には Adaptable さないMeeting body であることがIt is clear that した.そこで, coliforms other than the の発 appear the system を use the いる system の検を开start めた. (2) Insect cell SF-9 of the R&D MDR SUR1 was constructed using the R&D method.そのRESULT, ウエスタンブロットで発appears to confirm することができた.そこで, interface active 扤のAdaptability を Adjustment べるとともに, 小スケールでのRefined をtest みた. (3) Detailed explanation of the structure of sugar locks and the origin of the silver leaf disease bacteria The チュロナーゼを uses the いてsugar lock's structure and がcrystallization and ぼす's influence to grasp the のた. The result of the problem, the problem of the existence of the sugar lock structure, the multi-dimensional nature of the structure, the obstacles to crystallization, and the confirmation of the problem.すなわち、sugar lock structureに多様性があるoccasionは、moving light scatteringによるmoleculesサイズの分The polydisperse phase of the cloth is shown, and the crystallization of the polydisperse is made of crystallization. One side, crystallized enzyme, modified sugar lock structure, pure enzyme, X-ray crystal structure analysis, three-dimensional structure, three-dimensional structure.このcrystallization, SPring-8 のシンクロトロンradiation X-ray をUsed in 0.96Å いた case, the more える decomposition ability をhas しており, ARP/wARP プログラムを Use いることにより, automatic にmolecule モデルを to build することができた.

项目成果

期刊论文数量（1）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

中津亨: "構造機能の相同性とアミノ酸配列の非相同性"化学と生物. 37. 487-491 (1999)

Toru Nakatsu：“结构功能同源性和氨基酸序列非同源性”化学与生物学 37. 487-491 (1999)。

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加藤博章其他文献

Lafitidine-induced increase in intracellular Ca2+ concentrations in PC12 and endothelial cells.

拉菲替丁诱导 PC12 和内皮细胞细胞内 Ca2+ 浓度增加。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Pharmacol.Sci. 97
影响因子：
0
作者：
Kashiwayama;Y.;Tsugumi Nakanishi;Takao Hibi;Hiroyuki Shibata;Tatsuya Uzumaki;Kentaro Ifuku;Toru Komatsu et al.;Mamoru Matsubara;Tasuku Ueno et al.;加藤博章;Yu Gabe et al.;Kazuki Kiyose et al.;Takuya Terai et al.;Takatoshi Yogo et al.;Mako Kamiya et al.;Kensuke Komatsu et al.;Eita Sasaki et al.;Yasuteru Urano et al.;Eri Kawabata et al.;Shigeki Hattori et al.;Tasuku Ueno et al.;Kenjiro Hanaoka et al.;Daisuke Nagata et al.;Suguru Kenmoku et al.;Yu Gabe et al.;Horie et al.;Kunieda et al.;Minowa et al.;Kunieda et al.
通讯作者：
Kunieda et al.

A General Synthesis of N-Reverse-Prenyl Indoles

N-反异戊二烯吲哚的一般合成

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Synthesis
影响因子：
0
作者：
Kashiwayama;Y.;Tsugumi Nakanishi;Takao Hibi;Hiroyuki Shibata;Tatsuya Uzumaki;Kentaro Ifuku;Toru Komatsu et al.;Mamoru Matsubara;Tasuku Ueno et al.;加藤博章;Yu Gabe et al.;Kazuki Kiyose et al.;Takuya Terai et al.;Takatoshi Yogo et al.;Mako Kamiya et al.;Kensuke Komatsu et al.;Eita Sasaki et al.;Yasuteru Urano et al.;Eri Kawabata et al.;Shigeki Hattori et al.;Tasuku Ueno et al.;Kenjiro Hanaoka et al.;Daisuke Nagata et al.;Suguru Kenmoku et al.;Yu Gabe et al.;Horie et al.;Kunieda et al.;Minowa et al.;Kunieda et al.;Minowa et al.;K.Yoshizawa;K.Yoshizawa;K.Yoshizawa;W.I.Li;Kubota et al.;T.Shioiri;F.Yokokawa
通讯作者：
F.Yokokawa