X線解析を目指した多剤耐性ポンプMDR1の大量発現系の構築と結晶化
用于X射线分析的多药耐药泵MDR1大规模表达系统的构建和结晶
基本信息
- 批准号:16659012
- 负责人:
- 金额:$ 2.18万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:2004
- 资助国家:日本
- 起止时间:2004 至 2005
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
ヒトの多剤耐性ポンプMDR1を対象として、X線結晶構造解析を目的とした結晶化を達成することを目的として以下の研究を行なった。1.X線結晶解析に適したMDRl結晶の調製結晶化条件探索を広範囲に拡大するため、更なる大量生産系を構築した。すなわち、30リットル/1ヶ月の培養ペースで連続して安定な生産が可能になった。さらに、精製蛋白質の質的改善を目指し、構造安定性の向上に寄与する界面活性剤を検索した。約20種類の界面活性剤を検討した結果、1つの界面活性剤が新たに見つかった。一方、結晶化能を向上させると予想される2種類の部位特異的変異導入蛋白質を大量発現、精製することに成功した。得られた精製標品を用いて結晶化を行なったところ、微針状結晶からキューブ状の微結晶が得られた。しかし、X線を照射してもX線回折像は得られなかった。さらに改良を検討している。2.Fab複合体調製による結晶化の支援MDR1の細胞外ドメインに対するモノクローナル抗体を入手して検索した結果、立体構造特異的な結合をしていると示唆されるFab断片を得ることができた。そして、MDR1との複合体を形成していることがゲル濾過から示された。3.膜蛋白質の結晶化能を把握する手法の確立可溶性蛋白質では、精製した蛋白質溶液の動的光散乱分析により分子量分布の狭い試料は結晶化の可能性が高いことが知られている。そこで、膜タンパク質における同様の方法を検討した。その結果、電子顕微鏡を用いた蛋白質分子の直接観察およびゲル濾過法の利用により、界面活性剤の存在下でも分子量分布の広狭の違いを観測することが可能になった。
ヒ ト の tonic more patience ポ ン プ MDR1 を like と seaborne し て, X-ray crystal structure analytic を purpose と し た crystallization を reached す る こ と を purpose と し て following の を line な っ た. X-ray crystallization analysis に suitable for <s:1> たMDRl crystallization <s:1> modulation crystallization conditions exploration を wide 囲に拡 large するため and more なる mass production system を construction of た. す な わ ち, 30 リ ッ ト の ヶ ル / 1 month training ペ ー ス で even 続 し て settle な production が may に な っ た. Youdaoplaceholder0, improvement of refined protein quality を points to を, structural stability <e:1> is sent upward to に and する interfacial active agent を検 cables た た. About 20 kinds of <s:1> interfacial activators を検 discussion on た た results, 1 <s:1> <s:1> interfacial activator が new たに see った った. Side, crystallization can を up さ せ る と to think さ れ る 2 kinds の site specific - different import protein を 発 now, refined す る こ と に successful し た. Have to ら れ た refined label product を い て crystallization を line な っ た と こ ろ, micro needle crystal か ら キ ュ ー ブ shape の micro crystalline が very ら れ た. The った, X-ray を, irradiating the て, and the X-ray refraction image を result in られな った った. Youdaoplaceholder0 improve を検 discuss て る る. 2. The overall complex modulation に よ る crystallization の support MDR1 の extracellular ド メ イ ン に す seaborne る モ ノ ク ロ ー ナ を ル antibody of し て 検 cable し た results, as well as the combination of three-dimensional structure specific な を し て い る と in stopping さ れ る Fab fragment を must る こ と が で き た. そ し て, MDR1 と の complex を form し て い る こ と が ゲ ル filtration か ら shown さ れ た. 3. の membrane protein crystallization can hold す を る gimmick の establish soluble protein で は, refined し た protein solution の dynamic analysis of the scattered light に よ り の narrow molecular weight distribution い sample は crystallization likely が の い こ と が know ら れ て い る. Youdaoplaceholder0 を検 で, membrane タ パ パ における the same <s:1> method を検 for た た. そ の results, electronic 顕 micromirror を with い た の protein molecules directly 観 examine お よ び ゲ ル filter way の using に よ り, interfacial active presence of tonic の で も molecular weight distribution の hiroo narrow の violations い を 観 measuring す る こ と が may に な っ た.
项目成果
期刊论文数量(16)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Crystal structure of a myristoylated CAP-23/NAP-22 N-terminal domain complexed with Ca2+/calmodulin
- DOI:10.1038/sj.emboj.7600093
- 发表时间:2004-02-25
- 期刊:
- 影响因子:11.4
- 作者:Matsubara, M;Nakatsu, T;Taniguchi, H
- 通讯作者:Taniguchi, H
Role of Pex19p in the targeting of PMP70 to peroxisome
- DOI:10.1016/j.bbamcr.2005.10.006
- 发表时间:2005-12-15
- 期刊:
- 影响因子:5.1
- 作者:Kashiwayama, Y;Asahina, K;Imanaka, T
- 通讯作者:Imanaka, T
Crystal structures of pyruvate phosphate dikinase from maize revealed an alternative conformation in the swiveling-domain motion.
- DOI:10.1021/bi0484522
- 发表时间:2005-02
- 期刊:
- 影响因子:2.9
- 作者:T. Nakanishi;T. Nakatsu;M. Matsuoka;K. Sakata;H. Kato
- 通讯作者:T. Nakanishi;T. Nakatsu;M. Matsuoka;K. Sakata;H. Kato
Crystal structure of the PsbP protein of photosystem II from Nicotiana tabacum
- DOI:10.1038/sj.embor.7400113
- 发表时间:2004-04-01
- 期刊:
- 影响因子:7.7
- 作者:Ifuku, K;Nakatsu, T;Sato, F
- 通讯作者:Sato, F
ABC蛋白質の立体構造研究-現状と課題-ABC蛋白質(植田和光編)
ABC蛋白的三维结构研究 - 现状与问题 - ABC蛋白(上田一光主编)
- DOI:
- 发表时间:2005
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Tomomi;Sato;加藤 博章
- 通讯作者:加藤 博章
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加藤 博章其他文献
Lafitidine-induced increase in intracellular Ca2+ concentrations in PC12 and endothelial cells.
拉菲替丁诱导 PC12 和内皮细胞细胞内 Ca2+ 浓度增加。
- DOI:
- 发表时间:
2005 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
Kashiwayama;Y.;Tsugumi Nakanishi;Takao Hibi;Hiroyuki Shibata;Tatsuya Uzumaki;Kentaro Ifuku;Toru Komatsu et al.;Mamoru Matsubara;Tasuku Ueno et al.;加藤 博章;Yu Gabe et al.;Kazuki Kiyose et al.;Takuya Terai et al.;Takatoshi Yogo et al.;Mako Kamiya et al.;Kensuke Komatsu et al.;Eita Sasaki et al.;Yasuteru Urano et al.;Eri Kawabata et al.;Shigeki Hattori et al.;Tasuku Ueno et al.;Kenjiro Hanaoka et al.;Daisuke Nagata et al.;Suguru Kenmoku et al.;Yu Gabe et al.;Horie et al.;Kunieda et al.;Minowa et al.;Kunieda et al. - 通讯作者:
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A General Synthesis of N-Reverse-Prenyl Indoles
N-反异戊二烯吲哚的一般合成
- DOI:
- 发表时间:
2004 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
Kashiwayama;Y.;Tsugumi Nakanishi;Takao Hibi;Hiroyuki Shibata;Tatsuya Uzumaki;Kentaro Ifuku;Toru Komatsu et al.;Mamoru Matsubara;Tasuku Ueno et al.;加藤 博章;Yu Gabe et al.;Kazuki Kiyose et al.;Takuya Terai et al.;Takatoshi Yogo et al.;Mako Kamiya et al.;Kensuke Komatsu et al.;Eita Sasaki et al.;Yasuteru Urano et al.;Eri Kawabata et al.;Shigeki Hattori et al.;Tasuku Ueno et al.;Kenjiro Hanaoka et al.;Daisuke Nagata et al.;Suguru Kenmoku et al.;Yu Gabe et al.;Horie et al.;Kunieda et al.;Minowa et al.;Kunieda et al.;Minowa et al.;K.Yoshizawa;K.Yoshizawa;K.Yoshizawa;W.I.Li;Kubota et al.;T.Shioiri;F.Yokokawa - 通讯作者:
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車両運動統合制御における理論限界の明確化と達成(機械力学,計測,自動制御)
车辆综合运动控制(机械动力学、测量、自动控制)理论极限的阐明和实现
- DOI:
- 发表时间:
2007 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
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- DOI:
- 发表时间:
2020 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
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親和性標識によるP糖タンパク質CmABCB1の基質結合部位の多様性の解析
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- DOI:
- 发表时间:
2019 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
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加藤 博章
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化学的捕捉による多剤排出輸送体の多様な動的基質認識メカニズムの分子構造基盤
化学捕获多药外排转运蛋白多种动态底物识别机制的分子结构基础
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国際緊急援助活動と日本外交―1987―1993
国际紧急救援活动与日本外交 - 1987-1993
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13033044 - 财政年份:2001
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