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糖鎖修飾によるタンパク質構造安定化機構の構造生物学的研究

糖基化蛋白质结构稳定机制的结构生物学研究

基本信息

批准号：
17046008
负责人：
加藤博章
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17046008/
关键词：
糖鎖タンパク質酵素 X線結晶構造解析 X線結晶解析構造生物学

项目摘要

本研究は、リンゴ銀葉病菌(Stereum purpureum)の生生するペクチン質分解素、エンドポリガラクツロナーゼI(endoPG I)を対象として、その糖鎖修飾による構造安定化機構について構造生物学的に解明することを目的とした。大腸菌を用いて得られた組換えendoPG Irは温度安定が20℃低下した。両者のアミノ酸配列は同一であることから、この熱安定性の低下は、糖鎖修飾が行われなかったためと考えられた。そこで、endoPG Irについて酵素単独の構造と反応生成物ガラクツロン酸(GalpA)との複合体それぞれの立体構造を決定し、それぞれの構造の違いを調べた。その結果、糖鎖付のendoPG IにおいてAla89-Ile94のループの動きをAsn92への糖鎖修飾が抑制することを結晶構造中で確認した。しかし、さらに解析を進めた結果、Asn92への糖鎖付加によるループ構造の安定化は、結晶化に伴うタンパク質分子同士の接触によるものであり、溶液中では影響がないであろうと考えられた。一方、糖鎖付のendoPG Iと糖鎖なしのendoPG Irを示差熱量計(DSC)解析で比較したところ、endoPG IrはendoPG Iに対し変性温度がほぼ同じ分子と約13度低下した分子の混合物であることが示唆された。そこで、両者の結晶構造を詳細に比較した結果、endoPG Irの一部の分子はCys300-Cys303間のジスルフィド結合が形成されておらず、これが熱安定性低下の主要因と考えられた。そこで、DSCで判明した低温側の変性温度70℃で処理し、変性物を除いたendoPG IrについてX線結晶構造解析を行なったところ、問題のジスルフィド結合が完全に形成されていることが確認された。

In this study, pathogens (Stereum purpureum), pathogens (Stereum purpureum), antifungal agents, antiseptic agents, biodegradants, antifungal agents, antifungal pathogens, biodegradants, biodegradants, antifungal agents, antifungal pathogens, biodegradants, antifungal agents, antifungal pathogens, biodegradable bacteria, antifungal pathogens, antifungal pathogens The temperature of endoPG Ir was stable at 20 ℃. In the same order, the stability is low, the sugar is low, and the sugar is low. The enzyme was used to make the reverse product, the compound, the acid (GalpA), the complex, the stereo product, the enzyme, the compound, the acid (GalpA), the complex, the stereo, the enzyme, the compound, the acid, the acid (acid), the complex, the stereo, the enzyme, the compound, the acid, the acid (acid), the complex, the stereo, the enzyme, the compound, the acid (acid), the complex, the stereo, the enzyme, the enzyme, the The results show that the endoPG I do not need to Ala89-Ile94 the sugar to modify the Asn92 sugar to inhibit the growth of the results of the test. The results of the experiments, the results of the analysis, the stability of the Asn92Glycosyl sulfate, the crystallization of the molecules, the contact temperature of the same molecules, and the determination of the temperature in the solution. On the one hand, endoPG I, sugar, sugar, endoPG Ir, difference, DSC, endoPG Ir, endoPG, temperature, temperature, The results of the results showed that the results of the comparison results, the combination of the molecular Cys300-Cys303 compounds of the endoPG Ir and the low stability of the drugs were mainly due to the results of the comparison results. It is determined that the temperature of the low temperature temperature is 70 ℃, the temperature of the temperature is 70 ℃, the temperature of the temperature is 70 ℃, and the temperature is 70 ℃.

项目成果

期刊论文数量（2）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Design, synthesis, and enzymatic property of a sulfur-substituted analogue of trigalacturonic acid

DOI：
10.1016/j.bmcl.2005.08.019
发表时间：
2005-11-15
期刊：
BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS
影响因子：
2.7
作者：
Yamamoto, K;Watanabe, N;Okuno, T
通讯作者：
Okuno, T

Expression, purification and crystallization of endopolygalacturonase from a pathogenic fungus, Stereum purpureum, in Escherichia coli

病原真菌紫紫菌内切多聚半乳糖醛酸酶在大肠杆菌中的表达、纯化和结晶

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Protein Expression and Purification 44・2
影响因子：
0
作者：
Shimizu;T.
通讯作者：
T.

DOI：
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作者：
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加藤博章其他文献

Lafitidine-induced increase in intracellular Ca2+ concentrations in PC12 and endothelial cells.

拉菲替丁诱导 PC12 和内皮细胞细胞内 Ca2+ 浓度增加。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Pharmacol.Sci. 97
影响因子：
0
作者：
Kashiwayama;Y.;Tsugumi Nakanishi;Takao Hibi;Hiroyuki Shibata;Tatsuya Uzumaki;Kentaro Ifuku;Toru Komatsu et al.;Mamoru Matsubara;Tasuku Ueno et al.;加藤博章;Yu Gabe et al.;Kazuki Kiyose et al.;Takuya Terai et al.;Takatoshi Yogo et al.;Mako Kamiya et al.;Kensuke Komatsu et al.;Eita Sasaki et al.;Yasuteru Urano et al.;Eri Kawabata et al.;Shigeki Hattori et al.;Tasuku Ueno et al.;Kenjiro Hanaoka et al.;Daisuke Nagata et al.;Suguru Kenmoku et al.;Yu Gabe et al.;Horie et al.;Kunieda et al.;Minowa et al.;Kunieda et al.
通讯作者：
Kunieda et al.

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N-反异戊二烯吲哚的一般合成

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发表时间：
2004
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Synthesis
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作者：
Kashiwayama;Y.;Tsugumi Nakanishi;Takao Hibi;Hiroyuki Shibata;Tatsuya Uzumaki;Kentaro Ifuku;Toru Komatsu et al.;Mamoru Matsubara;Tasuku Ueno et al.;加藤博章;Yu Gabe et al.;Kazuki Kiyose et al.;Takuya Terai et al.;Takatoshi Yogo et al.;Mako Kamiya et al.;Kensuke Komatsu et al.;Eita Sasaki et al.;Yasuteru Urano et al.;Eri Kawabata et al.;Shigeki Hattori et al.;Tasuku Ueno et al.;Kenjiro Hanaoka et al.;Daisuke Nagata et al.;Suguru Kenmoku et al.;Yu Gabe et al.;Horie et al.;Kunieda et al.;Minowa et al.;Kunieda et al.;Minowa et al.;K.Yoshizawa;K.Yoshizawa;K.Yoshizawa;W.I.Li;Kubota et al.;T.Shioiri;F.Yokokawa
通讯作者：
F.Yokokawa