Suppressive subtraction法による消化器疾患の分子病態の解明

用抑制减法法阐明胃肠道疾病的分子病理学

• 批准号: 12204047
• 负责人: 榎本 信幸
• 金额: --
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12204047/
• 关键词: 消化器疾患; 遺伝子発現; subtraction

<背景と目的>本研究では、suppressive subtraction法により、病変特異的に発現する遺伝子群を同定し、原因不明の消化器疾患の分子病態の解明を目指す。mRNAを特異的に増幅するSMART-PCRにより極少量の臨床検体より解析に必要な量のcDNAを増幅、suppressive subtractionにより病変部と正常部の遺伝子発現の差異を迅速・高効率に検出する。<検討結果>まず、生検材料から得られる微量のtotal RNAよりmRNAを特異的にlong distance PCRにより増幅するSMART PCR法を導入し、lugのtotal RNAから数+microgramのmRNA由来のcDNAを得ることが可能となった。さらに、suppressive subtraction法による高効率のsubtraction cloningを行い、疾患特異的発現をする遺伝子のPCR産物を得ることができた。<考察>SMART-PCRにより得られたcDNAは臓器特異的なband patternを示した。このcDNAに、controlとしてファージ由来のDNAを2000から4000分に1加え、同じcDNAをdriverとしてsubtractionを行うと、この加えたファージDNAのみを特異的に増幅することが可能であり、本法が数千分の1程度のわずかな遺伝子発現の相違を検出しうると考えられた。肝癌cDNAから周囲非癌部cDNAをsubtractionすることにより、FAK,GS,DCC,Gia,PGCなどの遺伝子が肝癌で特異的に発現していることを見いだした。また大腸癌から周辺正常大腸粘膜のsubtractionでは、同様にCEA,NCA,Bubl,Maspin,TOG,GABA-Rなどの遺伝子の発現を確認した。さらに、潰瘍性大腸炎ではSAA、慢性C型肝炎および自己免疫性肝炎ではIP10、原発性胆汁性肝硬変では種々のミトコンドリア遺伝子が発現していることを見いだした。以上より、本方法により消化器疾患に関連する遺伝子発現を臨床材料から同定することが可能であり、種々の病態の解明に有用であると考えられた。

Background Objective: This study aimed to identify and clarify molecular pathologies associated with disease-specific digestive disorders by suppressive subtraction. SMART-PCR results in a very small amount of cDNA amplification, suppressive subtraction, and rapid and efficient detection of differences in gene expression between diseased and normal regions. <Results> Total RNA, mRNA, mRNA, Long Distance PCR, SMART PCR, Total RNA, mRNA, cDNA, Long Distance PCR, SMART PCR In addition, suppressive subtraction method can be used to detect PCR products with high efficiency and disease specificity. SMART-PCR was used to detect cDNA and to detect the specific band pattern. This cDNA sequence is derived from DNA 2000 to 4000 minutes, and the same cDNA sequence is derived from DNA 2000 to 4000 minutes, and the same cDNA sequence is derived from DNA 2000 to 4000 minutes. Liver cancer cDNA fragments include non-cancerous cDNA fragments such as FAK,GS,DCC,Gia,PGC, etc. Subtraction of peripheral normal colorectal mucosa from colorectal cancer was confirmed by CEA,NCA,Bubl,Maspin,TOG,GABA-R and other genetic markers. In addition, ulcerative colitis, SAA, chronic hepatitis C, and autoimmune hepatitis, IP10, primary biliary cirrhosis, and other diseases occur. The above method is related to the development of digestive tract diseases.