Suppressive subtraction法による消化器疾患の分子病態の解明

用抑制减法法阐明胃肠道疾病的分子病理学

• 批准号: 12204047
• 负责人: 榎本 信幸
• 金额: --
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12204047/
• 关键词: 消化器疾患; 遺伝子発現; subtraction

<背景と目的>本研究では、suppressive subtraction法により、病変特異的に発現する遺伝子群を同定し、原因不明の消化器疾患の分子病態の解明を目指す。mRNAを特異的に増幅するSMART-PCRにより極少量の臨床検体より解析に必要な量のcDNAを増幅、suppressive subtractionにより病変部と正常部の遺伝子発現の差異を迅速・高効率に検出する。<検討結果>まず、生検材料から得られる微量のtotal RNAよりmRNAを特異的にlong distance PCRにより増幅するSMART PCR法を導入し、lugのtotal RNAから数+microgramのmRNA由来のcDNAを得ることが可能となった。さらに、suppressive subtraction法による高効率のsubtraction cloningを行い、疾患特異的発現をする遺伝子のPCR産物を得ることができた。<考察>SMART-PCRにより得られたcDNAは臓器特異的なband patternを示した。このcDNAに、controlとしてファージ由来のDNAを2000から4000分に1加え、同じcDNAをdriverとしてsubtractionを行うと、この加えたファージDNAのみを特異的に増幅することが可能であり、本法が数千分の1程度のわずかな遺伝子発現の相違を検出しうると考えられた。肝癌cDNAから周囲非癌部cDNAをsubtractionすることにより、FAK,GS,DCC,Gia,PGCなどの遺伝子が肝癌で特異的に発現していることを見いだした。また大腸癌から周辺正常大腸粘膜のsubtractionでは、同様にCEA,NCA,Bubl,Maspin,TOG,GABA-Rなどの遺伝子の発現を確認した。さらに、潰瘍性大腸炎ではSAA、慢性C型肝炎および自己免疫性肝炎ではIP10、原発性胆汁性肝硬変では種々のミトコンドリア遺伝子が発現していることを見いだした。以上より、本方法により消化器疾患に関連する遺伝子発現を臨床材料から同定することが可能であり、種々の病態の解明に有用であると考えられた。

< > background と purpose of this study で は, suppressive subtraction method に よ り, disease - specific に 発 now す る heritage 伝 subgroup を with し, unexplained の の digesters disease molecular pathological の interpret を refers す. MRNA を specific に rights of す る SMART - PCR に よ り tiny の clinical 検 body よ り parsing に necessary な amount の cDNA を rights, suppressive subtraction に よ り disease - department と normal department の heritage 伝 son 発 is の differences を quickly, high rate of unseen に 検 out す る. Beg results > < 検 ま ず, raw material 検 か ら have ら れ る trace の total RNA よ り mRNA を specific に long short PCR に よ り rights of す る SMART を import し PCR method, originally の total The RNA ら number +microgram <s:1> mRNA from the cDNAを gives る る とが possibly となった. さ ら に, suppressive subtraction method に よ る high working rate の subtraction cloning specific 発 を い, disease now を す る posthumous son 伝 を の PCR products have る こ と が で き た. < Investigation >SMART-PCRによ られた によ obtained られたcDNA られた organ-specific なband patternを indicating た た. こ の cDNA に, control と し て フ ァ ー ジ origin の DNA を 2000 か ら 4000 points 1 plus え に, with じ cDNA を driver と し て subtraction を line う と, こ の plus え た フ ァ ー ジ DNA の み を specific に rights of す る こ と が may で あ り, 1 degree の の が thousands of points of this law Youdaoplaceholder0 わず な the 伝 of 伝 shows that there is a contradiction between を検 and うると. Liver cDNA か ら weeks 囲 of carcinoma of cDNA を subtraction す る こ と に よ り, FAK (GS, DCC, Gia, PGC な ど の heritage 伝 son が で liver cancer specific に 発 now し て い る こ と を see い だ し た. ま た colorectal cancer か ら weeks 辺 normal colon mucosa の subtraction で は, with others in に CEA, NCA, Bubl, Maspin, TOG, GABA -r な ど の heritage 伝 son の 発 を now confirmed し た. さ ら に, ulcerative colitis で は SAA, chronic hepatitis C お よ び oneself immunity hepatitis で は IP10, original 発 biliary cirrhosis - で は kind 々 の ミ ト コ ン ド リ ア posthumous son 伝 が 発 now し て い る こ と を see い だ し た. Above よ り, this method に よ り digesters disorders に masato even す る posthumous son 伝 発 を clinical materials now か ら with fixed す る こ と が may で あ り, kind of 々 の pathological の interpret に useful で あ る と exam え ら れ た.