小胞体ストレスで誘導される分子シャペロンを標的としたC型肝炎治療の開発

开发针对内质网应激诱导的分子伴侣的丙型肝炎治疗方法

基本信息

批准号：
16659185
负责人：
榎本信幸
金额：
$ 2.05万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

サイクロスポリンAのHCV増殖抑制が、分子シャペロンであるサイクロフィリンの活性阻害によることを証明するために、特異的遺伝子発現抑制法であるsiRNAを用いてサイクロスポリンAの標的宿主遺伝子であるサイクロフィリン遺伝子発現の抑制を行いHCV増殖への影響を解析した。その結果、小胞体蛋白の分子シャペロンであるサイクロフィリンBのsiRNAによるノックダウンがHCV増殖を抑制することを確認し、Gastroenteologys誌に論文として発表した。種々のERストレスを惹起する薬剤、すなわち蛋白の糖鎖付加を阻害するツニカマイシン、小胞体内カルシウム濃度を低下させるタプシガルギンなどのHCV増殖に与える影響を解析し、ERストレスの中でも小胞体からのカルシウムの枯渇がHCV増殖を抑制することを見出した。また小胞体内に蓄積しERストレスを惹起すると考えらるHCV構造蛋白を発現し、これまでのHCV非構造蛋白のみを発現するHCVレプリコンよりも生体内のHCV増殖をより忠実に再現するHCV全長レプリコンとして、JFH株による培養細胞増殖系の導入を行った。今後、これによりERストレスとHCV増殖の関連を検討する予定である。ATF6はERストレスすなわち小胞体での異常蛋白の蓄積に反応して、小胞体より核に移行しERストレス反応遺伝子群の発現を誘導するERストレス制御の最も上流に位置する転写因子であり、実際にサイクロスポリンによりHCV増殖細胞内で発現が亢進することを見出した。今後、ATF6により誘導されるERストレス反応遺伝子群のなかの如何なる遺伝子がHCV増殖において本質的役割をになっているかを明らかとするため、DNAマイクロアレイを用いた網羅的解析により、HCV増殖下で活性化される遺伝子のなかで、ATF6反応性遺伝子を同定する予定である。

为了证明，环蛋白A中HCV生长的抑制是由于分子伴侣的抑制活性，我们使用了一种特定的基因表达抑制方法siRNA来抑制细胞周期蛋白基因的表达，即环磷脂A的靶宿主基因，并分析了对HCV生长的影响。结果，我们证实了环糖蛋白B（siRNA的内质网蛋白的分子伴侣）的敲低抑制了HCV的生长，并发表了一篇论文胃神论。我们分析了诱导各种ER胁迫的药物的作用，例如抑制蛋白质糖基化的女霉素和thapsigargin的糖基化，从而降低了内质网中钙浓度对HCV的生长，并发现钙从内质网抑制的钙中降低了压力。此外，使用JFH菌株作为HCV全长复制子引入了培养的细胞生长系统，该复制子表达了在内质网中积累的HCV结构蛋白，并被认为会诱导ER压力，并且更忠实地将HCV的hcv扩增在VIVO中比先前的HCV复制蛋白表达了HCV不可能表达HCV不可能。将来，我们计划研究ER应力与HCV增殖之间的关系。 ATF6是一个转录因子，它位于ER应激控制的最上游，它响应于ER应激，即异常蛋白质在内质网中的积累，是从内质网迁移到核向细胞核迁移到核的，并诱导ER应激基因的表达，并发现细胞的表达实际上是Cyclos prol的表达。将来，为了阐明ATF6诱导的ER应激响应基因中的哪些基因在HCV增殖中具有重要作用，我们计划通过使用DNA微阵列通过全面分析在HCV增殖下激活的基因中识别ATF6响应基因。