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Suppression subtraction法による消化器疾患の分子病態解析

抑制减法法对胃肠道疾病的分子病理学分析

基本信息

批准号：
13204027
负责人：
榎本信幸
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13204027/
关键词：
消化器疾患遺伝子発現 subtraction

项目摘要

(1)生検材料から得られる微量のtotal RNAよりmRNAを特異的にlong distance PCRにより増幅するSMART PCR法を導入し、lugのtotal RNAから数十microgramのmRNA由来のcDNAを得ることが可能となった。さらに、suppressive subtraction法による高効率のsubtraction cloningを行い、疾患特異的発現をする遺伝子のPCR産物を得ることができた。(2)肝癌cDNAと周囲非癌部cDNAをsubtractionすることにより、FAK, GS, DCC, Gia, PGC, decorinなどの遺伝子の肝癌における特異的な発現変化を見いだした。(3)大腸癌から周辺正常大腸粘膜のsubtractionでは、同様にCEA, NCA, Bub1, Maspin, T0G, GABA-R, dkk4などの遺伝子の発現を確認した。(4)慢性C型肝炎および自己免疫性肝炎ではchemokineであるIP-10が特異的に発現していた。(5)原発性胆汁性肝硬変では種々のミトコンドリア由来遺伝子が発現していることを見いだした。最近、消化器疾患においても遺伝子発現変化の解析にmicroarrayが導入されているが、個々の解析結果は多様であり、これらの疾患の病態の全体像を解明しうる普遍的な結果は未だ得られていないと思われる。本研究で同定された遺伝子変化もこれらのmicroarrayでの結果とは異なるものもあり、当面、これらの解析手法は相互に補完的な情報をもたらすと考えられる。一方、本研究で慢性肝炎で発現が上昇していることが明らかとIP-10は急性C型肝炎動物モデルのmicroarray解析でも最も発現変化の大きな遺伝子の一つであり、病態の解明に重要な分子と考えらる。

(1) Raw material: Micro-amount RNA, mRNA, specific long distance PCR, SMART PCR method, introduction, lug total The source of RNA is tens of micrograms, and the origin of mRNA is cDNA.さらに、Suppressive subtraction method によるHigh efficiency のsubtraction cloning を行い、Disease-specific 発appear をする伝子のPCR product ることができた. (2) Liver cancer cDNA and non-cancerous part cDNA subtraction, FAK, GS, DCC, Gia, PGC, decorinなどの缝子のLiver cancerにおけるspecificな発成変化を见いだした. (3) Colorectal cancer and normal colorectal mucosa are subtracted and confirmed by CEA, NCA, Bub1, Maspin, T0G, GABA-R, and dkk4. (4) Chronic hepatitis C, autoimmune hepatitis, chemokine, IP-10, specific に発成, していた. (5) Primary biliary cirrhosis of the liver. Recently, the analysis of digestive system diseases, the analysis of the disease of the digestive system, the introduction of microarray, and the analysis of individual cases The result is a lot of disease, and the general image of the illness is the general image of the disease. The general image is the result. The result of this study is the same as the original microarray and the results are different.ものもあり, face-to-face, これらのanalytical techniques and mutually complementary なinformation をもたらすとtest えられる. On the one hand, in this study, chronic hepatitis is present and rises, and IP-10 and acute hepatitis C are used in animals. The croarray analysis is the most important molecule and the most important molecule is the pathological analysis.