C型肝炎ウイルスNS5A蛋白によるHCV増殖制御機構の解明

阐明丙型肝炎病毒NS5A蛋白控制HCV生长的机制

• 批准号: 16017237
• 负责人: 榎本 信幸
• 金额: $ 6.14万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16017237/
• 关键词: C型肝炎; レプリコン; インターフェロン; IRF; ISDR

(1)HCV増殖制御分子群の同定我々はHCV replicon増殖細胞、repliconをIFNで除去(cure)したcured-Huh7細胞、naiveなHuh7細胞を用いた検討から、HCV-replicon増殖にはIFN誘導遺伝子群(ISG)の発現低下が必要であることを示してきた。これまでの検討により、ISGの中でもHCV増殖との関連が強く示唆された23蛋白に絞り込み、それぞれ強制発現とノックダウンを行い、増殖制御にcriticalな分子を探索した。その結果、現在までに報告されていないGBP-1,IFI-6-16,IFI-27の3分子が、強力な抗HCV効果を示す分子であることを明らかにした。(2)NS5A-ISDR配列によるreplicon増殖制御の解明NS5A-ISDRにおけるアミノ酸変異がHCV replicon増殖に与える影響を、同領域に系統的な変異を導入することにより解析した。(1)臨床検体から得られた、ISDRにおける様々なパターンの多数変異(>4)配列をrepliconに導入した。(2)アミノ酸変異数のみでなく、変異部位が増殖に与える影響を検討するため、臨床的な解析からIFN感受性との関連性が示唆された複数の特定部位における1アミノ酸変異を導入した。多数変異をもつrepliconすべて、また1アミノ酸変異を導入した群においては、特にIFN感受性との強い関連が示唆されているアミノ酸番号A2209の変異をrepliconに導入したとき増殖は著しく亢進し、HCV replicon増殖が臨床的なIFN感受性配列依存的に規定されていることが示された。3)HCV増殖制御因子サイクロフィリンの同定我々は昨年、免疫抑制剤であるサイクロスポリンAが、HCV repliconの細胞内増殖を特異的に抑制することを明らかにした。しかしながら同薬の抗HCV機序については不明であった。今回我々は、サイクロスポリンAの抗HCV機序が、PPIase(peptidyl prolyl cis-trans イソメラーゼ)活性を持つサイクロフィリンの抑制を通じたものであることを明らかにした。我々はさらに免疫抑制阻害活性を持たず、PPIase阻害活性のみ有するサイクロスポリンDの、抗HCV薬としての可能性も示した。

(1) HCV proliferation control molecule group is the same as HCV replicon proliferation cells, replicon IFN-removed (cure) cured-Huh7 cells, naive Huh7 cells It is necessary to use HCV-replicon and HCV-replicon to propagate IFN-induced genetic subgroups (ISG) and reduce the risk of infection.これまでの検问により, ISG の中でもHCV propagation とのassociated がstrong くshows instigation された23 protein に twist り込み、それぞれforced appearanceとノックダウンを行い、Proliferation controlにcriticalなmoleculesをExplorationした. The result of the test is now reported: GBP-1, IFI-6-16, IFI-27, 3 molecules, and strong anti-HCV effects are reported. (2)NS5A-ISDR Alignment of Replicon Proliferation Control and Control of NS5A-ISDR of Replicon Acid and Differentiation of HCV Replicon's multiplication and influence, the system's difference in the same field, the import and analysis of the same system. (1) Most of the differences (>4) in clinical clinical examination, ISDR rehabilitation, and ISDR replication are introduced. (2) Analyzes of アミノAcid のみでなく, がproliferation of different parts and える influence を検するため, clinical analysisからIFN sensitivity とのassociated がshows instigation されたplural のspecific parts における1アミノ sour 変different を Introduction した. Most of the different をもつreplicon すべて, また1アミノ sour 変different を import したgroup においては, 特にIFN sensitivity との强いRelated: HCV Replicon reproduction is clinically dependent on the IFN sensitivity spectrum. 3) HCV proliferation control factor, HCV Replicon has a specific inhibitory effect on intracellular proliferation.しかしながら Same as 薬のAnti-HCV machine sequence についてはUnknown であった. This time I will use 々は、サイクロスポリンAのanti-HCV machine sequenceが、PPIase(peptidyl prolyl cis-transイソメラーゼ)Active をholding つサイクロフィリンの inhibiting を通じたものであることを明らかにした. I have the ability to block immunosuppressive activity, to prevent PPIase activity, and to show the possibility of anti-HCV activity.

项目成果

Mutations in the NS5B region of the hepatitis C virus genome correlate with clinical outcomes of interferon-alpha plus ribavirin combination therapy

• DOI: 10.1111/j.1440-1746.2005.04024.x
• 发表时间: 2005-09-01
• 期刊: JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY
• 影响因子: 4.1
• 作者: Hamano, K;Sakamoto, N;Watanabe, M
• 通讯作者: Watanabe, M

Specific inhibition of hepatitis C virus replication by cyclosporin A

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2003.11.080
• 发表时间: 2004-01-02
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Nakagawa, M;Sakamoto, N;Watanabe, M
• 通讯作者: Watanabe, M

Changes of HCV quasispecies during combination therapy with interferon and ribavirin

• DOI: 10.1016/j.hepres.2004.02.014
• 发表时间: 2004-06-01
• 期刊: HEPATOLOGY RESEARCH
• 影响因子: 4.2
• 作者: Ueda, E;Enomoto, N;Watanabe, M
• 通讯作者: Watanabe, M

Introduction of NS5A mutations enables subgenomic HCV replicon derived from chimpanzee‐infectious HC‐J4 isolate to replicate efficiently in Huh‐7 cells

• DOI: 10.1111/j.1365-2893.2004.00525.x
• 发表时间: 2004-09
• 期刊: Journal of Viral Hepatitis
• 影响因子: 2.5
• 作者: S. Maekawa;N. Enomoto;N. Sakamoto;M. Kurosaki;E. Ueda;T. Kohashi;H. Watanabe;C.‐H. Chen;T. Yamashiro;Y. Tanabe;N. Kanazawa;M. Nakagawa;C. Sato;M. Watanabe

Site-specific mutation of the interferon sensitivity-determining region (ISDR) modulates hepatitis C virus replication

• DOI: 10.1111/j.1365-2893.2006.00739.x
• 发表时间: 2006-09-01
• 期刊: JOURNAL OF VIRAL HEPATITIS
• 影响因子: 2.5
• 作者: Kohashi, T.;Maekawa, S.;Watanabe, M.
• 通讯作者: Watanabe, M.