マウス第12番染色体上の肝がん関連遺伝子の探索

ヒト肝がんの早期遺伝子変化群を見出すために、日本産野生マウスMSMとラボラトリーマウスC3HのF1にDiethylnitrosamine(DEN)で誘発した肝がんを対象として、多数のマイクロサテライトマーカー(MITマーカー)を用いて検索したが有意な遺伝子欠失はみいだされなかった。そこでより詳細に遺伝子欠失とepigeneticな変化を検索するため、Restriction Landmark Genomic Scanning(RLGS)法を用いることにし、2年を費やしてMSM-C3Hマウスのgenetic linkage mapを完成した。このmapを用いてマウス肝がんを調べると、変異が集中するいくつかの染色体座位が同定された。本年度はその中で最も頻度が多い第12番染色体について解析を集中した。高頻度欠失領域の近傍のMITマーカーを用いた検索では遺伝子欠失が見出されず、この変異はメチル化などのepigeneticな変化か微小領域の欠失と考えられた。正常マウスの肝臓からDNAを抽出し、Not1 trapper法でクローニング用のゲルを多数作成し、それらよりスポットクローニングを行ない、変異スポットの一つをクローニングした。これは181bpの遺伝子断片で、この断片中にはExonの一部が含まれており、またCpG islandにリンクしている可能性が高い。しかしながら、遺伝子銀行でBLASTサーチを行なっても高いホモロジーを示す遺伝子は見出されない。現在この遺伝子断片をプローブとして検索をすすめている。

ヒト肝がんの早期遺伝子変化群を見出すために、日本産野生マウスMSMとラボラトリーマウスC3HのF1にDiethylnitrosamine(DEN)で誘発した肝がんを対象として、多数のマイクロサテライトマーカー(MITマーカー)を用いて検索したが有意な遺伝子欠失はみいだされなかった。そこでより詳細に遺伝子欠失とepigeneticな変化を検索するため、Restriction Landmark Genomic Scanning(RLGS)法を用いることにし、2年を費やしてMSM-C3Hマウスのgenetic linkage mapを完成した。このmapを用いてマウス肝がんを調べると、変異が集中するいくつかの染色体座位が同定された。本年度はその中で最も頻度が多い第12番染色体について解析を集中した。高頻度欠失領域の近傍のMITマーカーを用いた検索では遺伝子欠失が見出されず、この変異はメチル化などのepigeneticな変化か微小領域の欠失と考えられた。正常マウスの肝臓からDNAを抽出し、Not1 trapper法でクローニング用のゲルを多数作成し、それらよりスポットクローニングを行ない、変異スポットの一つをクローニングした。これは181bpの遺伝子断片で、この断片中にはExonの一部が含まれており、またCpG islandにリンクしている可能性が高い。しかしながら、遺伝子銀行でBLASTサーチを行なっても高いホモロジーを示す遺伝子は見出されない。現在この遺伝子断片をプローブとして検索をすすめている。