人工ウイルス(高分子ミセル型ベクター)を用いた細胞内遺伝子導入法の確立

利用人工病毒（聚合物胶束载体）建立细胞内基因转移方法

• 批准号: 12877221
• 负责人: 川口 浩
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877221/
• 关键词: 遺伝子導入; 遺伝子ベクター; 高分子; ミセル; 遺伝子治療; DNA; 安定性; ウイルス

1)高分子ミセル型ベクターの安定性:生体内環境での遺伝子導入において、ベクター粒子、及び内包されたDNAの安定性は遺伝子導入効率と密接に関連する。この点、従来までの代表的非ウィルスベクターであるリポソーム法はこの安定性に大きな問題があった。本研究にて、まず高分子ミセル型ベクターに内包されたDNAは優れたヌクレアーゼ耐性、血清に対する安定性を持つことを、電気泳動法により明らかにした。さらに、二重蛍光標識DNAを用いて、ベクター粒子内でのDNAの凝縮を蛍光エネルギー移動(fluorescence resonance energy transfer : FRET)にて観察する新手法を考案し、ベクター粒子の形成、ベクターからのDNAの放出、その安定性を非常に鋭敏に観察できることを見出した。本手法は種々の生理的環境下でもベクター粒子の直接観察が可能である点が特長で、この評価により、高分子ミセル型ベクターはほぼ24時問にわたって血清中に安定に存在することが確認された。2)高分子ミセル型ベクターによる遺伝子導入:1)と関連し、本ペクターでは特に血清存在下でリポソーム法をはるかに上回る遺伝子導入が可能であった。また、その機序として、細胞へのリポソームの取り込みが血清存在下では著明に減少するのに対し、高分子ミセル型ベクターではほとんど影響を受けず、生理的環境下での遺伝子導入に非常に有用であることが示された。3)リガンド連結ベクター:ミセル外殻へのリガンドとして、これまでにラクトース連結ブロック共重合体の合成に成功した。これは、主に肝細胞系に発現しているグリコアシアロプロテインレセプターをターゲットにするもので、肝細胞系cell lineであるHepG2細胞に対しての遺伝子導入で、明白な導入効率向上が認められた。

Type 1) polymer ミ セ ル ベ ク タ ー の stability: born in vivo environment で の posthumous son 伝 import に お い て, ベ ク タ ー particle, and び insourcing さ れ た traces of DNA の stability は 伝 son import working rate と contact に masato even す る. こ の point, 従 ま で の representative of ウ ィ ル ス ベ ク タ ー で あ る リ ポ ソ ー ム method は こ の stability に big き な problem が あ っ た. This study に て, ま ず polymer ミ セ ル type ベ ク タ ー に insourcing さ れ た DNA は optimal れ た ヌ ク レ ア ー ゼ patience, serum に す seaborne る stability を hold つ こ と を, electric 気 swimming に よ り Ming ら か に し た. さ ら に, double 蛍 light logo DNA を い て, ベ ク タ ー particles within で の の DNA condensation を 蛍 light エ ネ ル ギ ー mobile (fluorescence resonance energy transfer: FRET) に て 観 examine す る new gimmick し を test case, ベ ク タ の ー particle formation, ベ ク タ ー か ら の DNA の release, そ の stability を very に acuity に 観 examine で き る こ と を shows し た. This technique は kind 々 の physiological environment で も ベ ク タ ー particle can の 観 directly examine が で あ る が specialty で, こ の review 価 に よ り, polymer ミ セ ル type ベ ク タ ー は ほ ぼ 24 when asked に わ た っ て in serum に settle に exist す る こ と が confirm さ れ た. Type 2) polymer ミ セ ル ベ ク タ ー に よ る posthumous son 伝 import: 1) と masato し, this ペ ク タ ー で は に especially in the presence of serum で リ ポ ソ ー ム method を は る か に last る heritage 伝 son import が may で あ っ た. ま た, そ の machine sequence と し て, cell へ の リ ポ ソ ー ム の take り 込 み が serum in the presence of で は zhao Ming に reduce す る の に し seaborne, polymer ミ セ ル type ベ ク タ ー で は ほ と ん ど を by け ず, physiological environment で の posthumous son 伝 import に very useful に で あ る こ と が shown さ れ た. 3) リ ガ ン ド link ベ ク タ ー : ミ セ ル shell へ の リ ガ ン ド と し て, こ れ ま で に ラ ク ト ー ス link ブ ロ ッ ク weigh fit の synthetic に successful し た. こ れ は, main に liver cell line に 発 now し て い る グ リ コ ア シ ア ロ プ ロ テ イ ン レ セ プ タ ー を タ ー ゲ ッ ト に す る も の で cell, liver cell line で あ る HepG2 cells に し seaborne て の heritage 伝 import で, understand な import working rate upward が recognize め ら れ た.