权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

可溶性グアニレートシクラーゼのNOに誘起される構造変化:可視及び紫外共鳴ラマン分光法による研究

NO 诱导的可溶性鸟苷酸环化酶结构变化：可见光和紫外共振拉曼光谱研究

基本信息

批准号：
01F00289
负责人：
北川禎三
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

Dr.B.PALは、平成13年11月に訪日後、まず共鳴ラマンスペクトルの測定法を学び、色々なレーザーを1人で発振させ、それを光源としてラマンスペクトルを測定できるようになった。次に可溶性グアニレートシクラーゼをウシ肺から単離、精製した。4kgの肺から3mgの純粋な酵素を得る事に成功した。この酵素を用いて活性と共鳴ラマンスペクトルを測定した。NO付加体は活性が200倍以上高くなるのにCO付加体は4倍程度しか上昇しなかった。しかしYC-1というエフェクターを加えると、CO付加体の活性が200倍程度上昇した。共鳴ラマン分光法でFe-CO伸縮振動を測定してみると、エフェクター無しではFe-CO伸縮振動は473cm^<-1>に1本バンドが見えたが、YC-1を入れると487cm^<-1>に肩が出てきた。そこにGTPを加えると487cm^<-1>にバンドが完全にシフトすると同時に521cm^<-1>に新たにCO同位体鋭敏バンドが現れた。後者を5配位ヘムすなわちFe-ヒスチジン結合の切れた5配位CO錯体に帰属した。一方、大阪府立大学農学部の津山伸吾教授の研究室に出向し、昆虫ヴィールス系に本酵素の遺伝子を組み込んだベクターを入れ、人工的に本酵素を合成しようとした。活性のある蛋白質はとれたが発現効率が悪く、ラマン分光法の測定に十分な量の蛋白がまだ得られていない。そこでヘムを含む部分のみの発現を大腸菌でやる事を試み、βサブユニットの1番から382番までの残基とヘムを含む部分を合成する事に成功した。この発現を効率よくして紫外共鳴ラマンの実験をやれる量の蛋白を得る努力をする予定である。

Dr.B.PAL, Pingcheng, November, 13th, November, December, December, 1998, November, December, 1998, November, December, December, In the second half of the year, the lungs were isolated from the lungs. 4kg, 3mg, enzyme, enzyme. The enzyme was used to determine the activity of the enzyme. The activity of NO is more than 200times higher than that of CO. The activity of CO is 200 times higher than that of YC-1. The total amount of electricity is measured by the Fe-CO method. The test results show that there is no contact between the two parts of the Fe-CO system. The whole system is 473cm ^ & lt;-1>. This is the first time that the YC-1 is loaded into the device 487cm ^ & the lt;-1> is loaded out of the device. Please add the GTP to 487cm^ & lt;-1> to the full to 521cmat the same time as the lt;-1> to the CO appositive sensor. The latter is called "5-coordination". The combination of "5-coordinate" and "5-coordinate" Fe- errors is related to the location of the CO error. On the one hand, the laboratory of Professor Shinigo Toriyama of the Department of Agriculture, Osaka Prefecture University, the department of insects and insects, and the artificial synthesis of this enzyme. The activity of protein was measured by spectrophotometry, and the protein was measured by spectrophotometry. In the first part of the experiment, we found that the bacteria were successfully synthesized in the first part, and the residue was detected in the first part. In order to measure the amount of protein, we should try our best to determine the accuracy of the measurement.