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可溶性グアニレートシクラーゼのNOに誘起される構造変化:可視及び紫外共鳴ラマン分光法による研究

NO 诱导的可溶性鸟苷酸环化酶结构变化：可见光和紫外共振拉曼光谱研究

基本信息

批准号：
01F00289
负责人：
北川禎三
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

Dr.B.PALは、平成13年11月に訪日後、まず共鳴ラマンスペクトルの測定法を学び、色々なレーザーを1人で発振させ、それを光源としてラマンスペクトルを測定できるようになった。次に可溶性グアニレートシクラーゼをウシ肺から単離、精製した。4kgの肺から3mgの純粋な酵素を得る事に成功した。この酵素を用いて活性と共鳴ラマンスペクトルを測定した。NO付加体は活性が200倍以上高くなるのにCO付加体は4倍程度しか上昇しなかった。しかしYC-1というエフェクターを加えると、CO付加体の活性が200倍程度上昇した。共鳴ラマン分光法でFe-CO伸縮振動を測定してみると、エフェクター無しではFe-CO伸縮振動は473cm^<-1>に1本バンドが見えたが、YC-1を入れると487cm^<-1>に肩が出てきた。そこにGTPを加えると487cm^<-1>にバンドが完全にシフトすると同時に521cm^<-1>に新たにCO同位体鋭敏バンドが現れた。後者を5配位ヘムすなわちFe-ヒスチジン結合の切れた5配位CO錯体に帰属した。一方、大阪府立大学農学部の津山伸吾教授の研究室に出向し、昆虫ヴィールス系に本酵素の遺伝子を組み込んだベクターを入れ、人工的に本酵素を合成しようとした。活性のある蛋白質はとれたが発現効率が悪く、ラマン分光法の測定に十分な量の蛋白がまだ得られていない。そこでヘムを含む部分のみの発現を大腸菌でやる事を試み、βサブユニットの1番から382番までの残基とヘムを含む部分を合成する事に成功した。この発現を効率よくして紫外共鳴ラマンの実験をやれる量の蛋白を得る努力をする予定である。

Dr.B.PAL, after his visit to Japan in November 2013, the resonance measurement method and color 々なレーザーを1人で発动させ、それを光源としてラマンスペクトルをmeasurement できるようになった. Sub-soluble silica gel is separated and refined. 4kg of lungs and 3mg of pure fermented enzymes have been used successfully. The activity of the enzyme was measured using the activity and resonance of the enzyme. The activity of NO plus body is more than 200 times higher, and the activity of CO plus body is 4 times higher.しかしYC-1 というエフェクターを加えると, CO added body's activity is increased by 200 times. Resonance ラマン spectrometry and measurement of Fe-CO stretching vibration してみると, エフェクター无しではFe-CO stretching vibration は4 73cm^<-1>に1本バンドが见えたが, YC-1を入れると487cm^<-1>にshoulderが出てきた.そこにGTPを加えると487cm^<-1>にバンドが全にシフトすAt the same time, るとに521cm^<-1>に新たにCO isotope 鋭民バンドがappears れた. The latter is a を5-coordinated ヘムすなわちFe-ヒスチジン combined with a をれた5-coordinated CO complex body に帰 belongs to した. On the one hand, Professor Shingo Tsuyama’s laboratory at the Faculty of Agriculture, Osaka Prefecture University, and the Department of Insect Research The original enzyme is a synthetic enzyme, and the artificial enzyme is a synthesized enzyme. The activity of the active protein is determined by the efficiency of the detection of the protein, and the detection of the protein by ラマン spectrometry is determined by the determination of the active protein.そこでヘムを contain part of のみの発 appear を coliform でやる事をtest み、βサブユニットの1片から382片までのResidue とヘムをcontaining part をSynthetic する事に成した.この発appearsをefficiencyよくしてUVresonanceラマンの実験をやれるquantityのproteinをgetsるeffortをするpredeterminedである.