細胞の生存を保証する神経栄養因子などのサバイバルファクターの作用機序の解明

阐明确保细胞存活的神经营养因子等存活因子的作用机制

• 批准号: 01F00506
• 负责人: 辻本 賀英
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01F00506/
• 关键词: Bcl-2; アポトーシス; ミトコンドリア; シトクロムc

アポトーシス制御因子Bcl-2ファミリーのメンバであるBaxやBak(アポトーシス促進メンバー)は、生細胞中では不活性な状態で存在するが、アポトーシス時に活性化し、シトクロムcなどのアポトーシスシグナル伝達物質をミトコンドリアから細胞質へ漏出させる。しかし、BaxやBak分子のアポトーシス時の活性化メカニズムの詳細は明らかにされていない。本申請研究では、Bakの活性化メカニズムを明らかにする目的で、Bakの構造変化を捕らえることができる特異的な抗体Ab1を用い、Bakの活性化誘導因子を探索することを試みた。アッセイ系として、ジギトニンで細胞膜の透過性を高めたpermeabilized HeLa細胞系を用いた。このpermeabilized細胞にアポトーシスを起こしつつある細胞由来の抽出液(デスライセート)を添加するとBakに対する免疫染色性が亢進することが分かった。このアッセイ系を利用して、マウスにFas抗体を投与しアポトーシスが誘導された肝臓からでライセートを抽出し、その中から、コンベンショナルなカラムクロマトグラフィを利用することにより、Bakの活性化誘導因子の部分精製に成功した。さらにそのたんぱくのアミノ酸配列を決定し、データベース検索により候補分子を同定し、そのDNAクローンを単離した。この分子にアポトーシス誘導活性があるかどうかなど、アポトーシスシグナル伝達における役割を現在、検討中である。

The control factor, Bcl-2, is sensitive to Baxter Bak, the status of inactivity in the cell is affected, the activity is activated, and there is a leak in the cell of the product. In this case, the Bax Bak molecule is active in time to activate the message in order to make sure that it is not true. In this application, we apply for the study of anti-Ab1 antibody, the activation of Bak, the detection of antibody Ab1, the activation of Bak, and the activation of Bak. The high permeability of the cell membrane, the high permeability of the cell membrane and the use of permeabilized HeLa cell lines. Permeabilized