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化学物質の持つアンドロジェン様作用の評価法に関する研究

化学物质雄激素样作用评价方法研究

基本信息

批准号：
13027288
负责人：
冨永伸明
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Ariake National College of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

内分泌攪乱作用の中でもアンドロジェン様作用に注目し,線虫において外部からのアンドロジェン作用によって発現が応答する遺伝子をcDNAマイクロアレイを用いて一斉検索を行った.線虫C. elegansをアルカリブリーチ処理し,得られた受精卵を14時間絶食下で孵化させ,L1幼虫に同調した.その後,餌の大腸菌を与え40時間培養し,L2-3期の幼虫まで成長させ,1から1000nMのテストステロンに5時間暴露した.コントロール群および暴露群からmRNAを調製し,それぞれをOligo(dT)をプライマーに逆転写する際Cy3,Cy5でラベルした.得られた標識cDNAを等量混ぜ,線虫cDNAマイクロアレイにハイブリダイズし,各スポットにおける蛍光強度をスキャナーを用いて測定した.コントロールと暴露群の蛍光強度の比から各遺伝子の発現変動を解析した結果,種々濃度のテストステロンへの暴露によって約200個の遺伝子の発現量上昇と数個の遺伝子の発現量の減少が観察できた.それらデータを蓄積し,統計的に有為なデータを抽出し,クラスター解析を行った結果,それぞれの実験における発現量変動パターンから遺伝子をいくつかのグループとして分類することができた.さらに,再現性良くマイクロアレイで遺伝子の発現上昇が観察された遺伝子の変動幅の上位グループの中から,30個について特異的プライマーを構築し,RT-PCRで発現量の変化を半定量したところ,数個の遺伝子はRT-PCRレベルでテストステロン暴露によって遺伝子発現の増加が確認できた.以上の結果から,線虫C. elegansはステロイドホルモンに対して遺伝子レベルで特異的に応答していることが示され,内分泌攪乱作用の評価系におけるモデル生物として適当であり,cDNAマイクロアレイを用いることで応答遺伝子を網羅的に一斉検索できることが示された.

Endocrine disrupting effect of nematodes, external nematodes The role of the によって発appears and the する伝子をcDNA マイクロアレイを用いて一斉検検行った. Nematode C. elegans をアルカリブリーチ treatment, the fertilized eggs were hatched after 14 hours of fasting, the L1 larvae were synchronized, and the bait was cultured with coliform bacteria for 40 hours, L2-3 stage larvae are grown, 1000nM 1000nM larvae are grown for 5 hours Expose the group. igo(dT)をプライマーに inverse write するinterCy3,Cy5でラベルした.getらMix equal amounts of れたlabeled cDNA and nematode cDNA. ,The light intensity of each light source is measured using the light source. The ratio of the light intensity of the exposure group is the result of the analysis of the current changes in the various species, and the concentration of the species is the result. About 200 の伝子の発 has been exposed in トステロンへのによって. The current quantity has increased and several の伝子の have been released. The current amount is reduced and the amount is accumulated. The statistical results are promising.出し,クラスターanalytic を行った results,それぞれの実験における発current amount change パターすることができた.さらに,Reappearance A good-natured person who has a good nature is now risingループの中から,30 についてspecific プライマーをconstructsし,RT-PCRで発Current の変化を semi-quantitative したところ, several の缝子はRT-PCR レベルでテストステロン出によって缝子発 appearのincrease and addがconfirmationできた.The above resultsから, nematode C. elegants Different types of irritants, endocrine disrupting effects, and endocrine disrupting effects.けるモデルbioticsとしてappropriateであり,cDNAマイクロアレイをいることで応respond to the remaining 伝子を恫一斉検SO できることがshow された.