改良遺伝子トラップ法による新規発生制御遺伝子の単離と機能解析

使用改进的基因捕获方法分离和功能分析新型发育调控基因

• 批准号: 13045014
• 负责人: 浅野 雅秀
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13045014/
• 关键词: 遺伝子トラップ; 発生制御転写因子; 原腸陥入; 中胚葉誘導; アデノウイルスベクター

遺伝子トラップは,トラップされる遺伝子の焦点を絞ることが難しいという欠点があったので,我々はレチノイン酸などの液性因子をES細胞に作用させるスクリーニングを工夫してきた。この方法で受容体型のチロシンキナーゼであるEphA2遺伝子のトラップに成功し,その変異マウスの解析からEphA2が尾部の脊索形成に重要な働きをしていることを明らかにした、本研究では更に改良を加えて,アデノウイルスベクターを用いて転写因子をES細胞で発現させることで,発生制御転与因子によって発現調節される遺伝子をトラップすることを試みる.本年度はトラップベクターの改良とアデノウイルスベクターの構築を行った。まず,トラップベクターであるが,以前より我々はSorianoらが開発したレトロウイルストラップベクターを用いていたが,遺伝子をトラップした後にトラップベクターを除去してレスキュー実験ができるように,(Cre-1oxPシステムを導入して改良を行った。次に発生制御転写因子としてBrachyury, HNF-3β,Pax-1を用いることにし,これらを強発現するアデノウイルスベクターをCOS-TPC法により作製した。これらの転写因子を大量に発現させると293細胞に対して毒性が見られたので,293細胞でベクターを増殖する時には挿入した転写因子遺伝子が発現しないように,1oxPで挟んだスタッファーをプロモーターの下流に入れたアデノウイルスベクターを用いることで作製に成功した。このアデノウイルスベクターを細胞に感染させる時に,同時にCreを発現させることによって,転写因子遺伝子の発現が誘導されることをノーザンとウエスタンで確認することができた。現在,レトロウイルストラップベクターをES細胞に感染させて,トラップクローンを大量に単離し,構築したアデノウイルスベクターをそれらに感染させることによって,発生制御転写因子によって発現がコントロールされているトラップ遺伝子の探索を行っている.

The focus of the gene is on the ES cells, and the focus of the gene is on the ES cells. This method was successfully used to analyze EphA2 gene expression in the tail of ES cells. The method was further improved in this study, and the expression factors were used to analyze the expression of EphA2 gene in ES cells. The growth factor is related to the growth factor. This year, we will improve the structure of the website. In the past, I have been working on Soriano's plan to open up the market, and I have been working on it since then. In the past, I have been working on it, and I have been working on it since then. The second generation control factor is Brachyury, HNF-3β,Pax-1, which is controlled by COS-TPC method. The expression of this gene was detected in large quantities in 293 cells, and the toxicity was detected in 293 cells. When the gene was propagated in 293 cells, the expression of this gene was detected in 1oxP cells. When the virus is infected, the expression of Cre is detected simultaneously, and the expression of the gene is induced. Now, it is necessary to construct a large number of isolation sites for ES cell infection, to construct a large number of isolation sites for ES cell infection, to develop control factors for ES cell infection, to develop control factors for ES cell infection, and to explore the development of ES cells.

项目成果

Naruse, C., et al.: "Involvement of EphA2 in the formation of the tail notochord via interaction with ephrinAl"Mechanisms of Development. 102. 95-105 (2001)

Naruse，C.等人：“EphA2 通过与 ephrinAl 相互作用参与尾脊索的形成”发育机制。

Nakae, S., et al.: "IL-1α, but not IL-1β, is required for contact-allergen-specific T cell activation during the sensitization phase in contact hypersensitivity"International Immunology. 13. 1471-1478 (2001)

Nakae, S., et al.：“在接触性超敏反应的致敏阶段，接触过敏原特异性 T 细胞的激活需要 IL-1α，而不是 IL-1β”，《国际免疫学》13. 1471-1478 (2001)。

Nakae, S., et al.: "IL-i enhances T cell-dependent antibody production through induction of CD4OL and OX40 on T cells"Journal of Immunology. 167. 90-97 (2001)

Nakae，S.，等人：“IL-i 通过诱导 T 细胞上的 CD4OL 和 OX40 来增强 T 细胞依赖性抗体的产生”《免疫学杂志》。

Fukamauchi, F., et al.: "TAG-1-deficient mice have marked elevation of adenosine Al receptors in the hippocampus"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 281. 220-226 (2001)

Fukamauchi, F., et al.：“TAG-1 缺陷小鼠的海马腺苷 A1 受体显着升高”Biochem.

Kotani, N. et al.: "Knockout of mouse β1, 4-galactosyltransferase-1 gene results in a dramatic shift of ouler chain moieties of N-glycans from type 2 to type 1 chains in hepatic membrane and plasma glycoproteins"Biochernical Journal. 357. 827-834 (2001)

Kotani, N. 等人：“敲除小鼠 β1, 4-半乳糖基转移酶-1 基因会导致肝膜和血浆糖蛋白中 N-聚糖的 ouler 链部分从 2 型链显着转变为 1 型链”《生物化学杂志》。 357.827-834（2001）