ツメガエル卵の受精成立の場を精製する試み

尝试改善非洲爪蟾卵的受精部位

• 批准号: 13045026
• 负责人: 佐藤 賢一
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13045026/
• 关键词: 受精; 卵活性化; シグナル伝達; ラフト; チロシンキナーゼ; プロテオミクス; ツメガエル; Src

研究目的 次の目標を掲げ、ツメガエル(以下、ゼノパス)卵の受精成立に関わる場、および関連生体分子を包括的に解析する。1)ゼノパス卵細胞膜ラフトの精製2)卵細胞膜ラフトにおけるシグナル伝達の解析3)受精関連ラフト構成因子の分子クローニング研究成果1)ゼノパス卵より低密度界面活性剤不溶性の膜画分(LD-DIM)を調製した。LD-DIMは全卵蛋白質の0.1%しか含まない一方で、コレステロールやGM1ガングリオシドに富む、いわゆる「ラフト」的性質を持っていた。LD-DIMは受精成立の鍵分子の一つであるチロシンキナーゼXykを含み、受精時の蛋白質チロシンリン酸化の場であることなどがわかった。LD-DIMからコレステロールを除去する薬剤処理を行うと受精阻害がおこった。このことは、LD-DIMが受精の成立に必要とされる細胞膜マイクロドメインであることを示唆している。2)1の結果を受けて、精製されたLD-DIMを使った受精シグナル伝達の再構成実験を開始した。LD-DIMがチロシンキナーゼ活性を保持していること、また驚いたことに生きた精子によってその活性が上昇することがわかった。このようなLD-DIMの「活性化」は幾つかの薬剤(GTPgsや過酸化水素)によっても再現可能であった。3)神戸大学バイオシグナル研究センターの吉野博士との共同により精製Xykの質量分析実験を行った。その結果、XykはゼノパスSrc遺伝子産物(Src1、Src2)の混合物であることが明らかになった。そこで、Src1/Src2遺伝子のクローニングと遺伝子改変を行い、野生型・活性化型・及び不活性化型の3種の遺伝子構築を完了した。COS7細胞を用いた発現実験から、Xykのラフト局在や、Xyk依存的な蛋白質チロシンリン酸化活性が確認された。

The purpose of this study is to analyze the field and molecular structure of zygotes involved in fertilization. 1) The purification of oocyte membrane 2) The analysis of oocyte membrane 3) The molecular structure of fertilization related factors 1) The modulation of oocyte membrane LD-DIM. LD-DIM maintains the properties of 0.1% of whole egg protein, including one side, one side, and one side of GM1. LD-DIM is a key molecule in the formation of fertilization. Xyk is a protein in fertilization. LD-DIM is the most effective way to prevent fertilization. The cell membrane is the key to fertilization. 2)1. The results of the study were analyzed and refined. LD-DIM was used for fertilization and reconstruction. The LD-DIM activity was maintained and increased. The LD-DIM "activation" of the drug (GTPgs) can be reproduced. 3)The quality analysis of refined Xyk was carried out jointly by Dr. Yoshino of Kobe University. As a result, the mixture of Src1 and Src2 was obtained. Three gene constructs of Src1/Src2 gene, wild-type, activated and inactivated, have been completed. COS7 cells were found to be active in the presence of Xyk and Xyk-dependent proteins.

项目成果

Sato, Ken-ichi: "Hydrogen peroxide induces Src family tyrosine kinase-dependent activation of Xenopus eggs"Devlopment Growth and Differentiation. 43. 55-72 (2001)

Sato, Ken-ichi：“过氧化氢诱导爪蟾卵的 Src 家族酪氨酸激酶依赖性激活”发育、生长和分化。

Fukami, Yasuo: "Inhibition and activation of c-Src : The head and tail of a coin"Pharmacology and Therapeutics. (印刷中). (2002)

Fukami Yasuo：“c-Src 的抑制和激活：硬币的头部和尾部”药理学和治疗（印刷中）。

Sato, Ken-ichi: "Low density detergent-insoluble membrane of Xenopus eggs : Subcellular microdomain for tyrosine kinase signaling in feftilization"Development. 129(印刷中). (2002)

Sato，Ken-ichi：“非洲爪蟾卵的低密度去污剂不溶性膜：受精过程中酪氨酸激酶信号传导的亚细胞微结构域”129（出版中）。

Tokmakov, Alexander A.: "Calcium oscillations in Xenopus egg cycling extracts"Journal of Cellular Biochemistry. 82. 89-97 (2001)

Tokmakov，Alexander A.：“非洲爪蟾卵循环提取物中的钙振荡”细胞生物化学杂志。

佐藤賢一: "新しい蛋白質研究、プロテオミクスがもたらすもの"BIOINDUSTRY. 18. 52-58 (2001)

Kenichi Sato：“新的蛋白质研究，蛋白质组学带来了什么”BIOINDUSTRY 18. 52-58 (2001)。