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左右非対称性決定機構の解明 -カルシウムは左右決定因子か?-

阐明决定左右不对称的机制 -钙是左右决定因素吗？-

基本信息

批准号：
13045044
负责人：
横山尚彦
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13045044/
关键词：
inv カルモデュリンカルシウム左右非対称性

项目摘要

脊椎動物の内部器官は心臓をはじめとして左右非対称性を形成する。我々はほぼすべてのホモ接合マウスにおいて内臓逆位を示す変異体(inv)を発見し、その原因遺伝子をクローニングした。マウスinv遺伝子は1062個のアミノ酸より成る蛋白をコードし,15回の繰り返しを持つアンキリン・モティフを持つ。この遺伝子は新規の遺伝子であり、その機能、そして機能制御に関しては全く不明であった。我々は、Yeast two hybrid systemを用い、inv遺伝子のアンキリン・モティフ部分をbaitとして腎臓のライブラリーをスクリーニングしたところ、calmodulinが結合することを見いだした。inv蛋白をシークエンスを再検したところ、calmodulinと結合すると考えられるモティフ(IQ motif)が2カ所に見いだされた。さらに、Gel overlay assayにてcalmodulinはcalicium binding proteinであり、標的蛋白との結合はcalciumによって制御されていることが知られている。そこで、CA2+,EGTAを反応液に加えて、inv-calmoduinの結合を調べたところ、通常の場合とは逆にEGTAにてCa2+を除去したときにinv蛋白とcalmodulinの結合が観察され、Ca2+存在下ではこの結合は逆に抑制されることがわかった。また、inv蛋白とGST融合蛋白、およびinv蛋白のペプチドに対する抗体を作製した。これらの抗体はinv遺伝子を導入したcos細胞においてinv蛋白をwestern blotにて検出した。inv遺伝子を導入したcos細胞を細胞分画してどの各分にinv蛋白が存在するかを検出しようと試みたが、inv蛋白の可溶化が出来ず同定するに至らなかった。

The internal organs of vertebrates are not symmetrical. We have a lot of information about the causes of the disease. 1062 amino acids and 15 amino acids were added to the protein. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone else. The two hybrid systems are designed to be used in conjunction with each other, in conjunction with each other and in conjunction with each other. Inv white Gel overlay assay calmodulin is calcium binding protein. The binding of EGTA to calmodulin is regulated by the addition of Ca2 +,EGTA and Ca2 +. In general, the binding of EGTA to calmodulin is inhibited by the addition of Ca2 +. Antibodies against GST fusion protein, inv protein, and inv protein The antibody is introduced into the cells, and the protein is expressed by western blot. Inv protein is introduced into cos cells and expressed in all parts of cells.