マウス瞬目反射条件付けに伴う小脳皮質活動の可視化

小鼠小脑皮质活动与眨眼反射调节相关的可视化

基本信息

批准号：
13210043
负责人：
道川貴章
金额：
$ 2.69万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題は、蛍光カルシウム指示タンパク質を用いることで、小脳皮質の中でも特定の細胞種だけの活動の可視化を試みるという特徴を持つ。そのため、いかに特異的にかつ十分な量の蛍光指示タンパク質を目的の細胞に発現させるかが重要となる。研究初年度の今年は、以下の2種類の発現方法についてそれぞれ発現パターンや発現量を解析し、さらに発現させた蛍光カルシウム指示タンパク質により実際に細胞内カルシウム上昇を検出できるかどうかについて検討を行った。1 アデノウィルスを用いた蛍光カルシウム指示タンパク質の発現アデノウィルスベクターは一時的発現ではあるが、導入発現効率が極めて高く、静止期の細胞(つまり分化した神経細胞)でも遺伝子導入が可能であるという特色を持つ。プルキンエ細胞特異的なプロモーターであるL7により蛍光カルシウム指示タンパク質cameleonを発現する組み換えアデノウィルスを作成し、マウス小脳初代分散培養系でプルキンエ細胞特異的なcamelonタンパク質の発現、およびグルタミン酸刺激による細胞内カルシウム濃度上昇の観察を行った。その結果、小脳初代培養系においてプルキンエ細胞特異的なカルシウムイメージングが可能であることが明らかとなった。2 トランスジェニックマウスを用いた蛍光カルシウム指示タンパク質の発現神経細胞特異的プロモーター(NSE)の下流にcameleonを連結した遺伝子を導入したトランスジェニックマウスを樹立した。

该研究主题的特征是使用荧光钙指示剂蛋白来尝试可视化小脑皮层中特定细胞类型的活性。因此，重要的是在感兴趣的细胞中表达特定数量的荧光指示剂蛋白。今年是研究的第一年，我们分析了以下两种表达方法的表达模式和表达水平，并进一步研究了表达的荧光钙指示剂蛋白是否实际检测到细胞内钙的增加。 1使用腺病毒的荧光钙指示剂蛋白表达，尽管腺病毒载体是暂时的表达，但其特征是它在引入时具有极高的效率，并且可以转移到固定细胞（即区分神经元）中。表达荧光钙指示剂蛋白蛋白的重组腺病毒是由Purkinje细胞特异性启动子L7产生的，在原发性分散的小鼠小脑培养物中，Purkinje细胞特异性的Cameleon蛋白的表达和细胞内钙浓度的增加被刺激被刺激性刺激。结果，据揭示了在初级小脑培养系统中可能可以使用Purkinje细胞特异性钙成像。 2使用转基因小鼠的2表达荧光钙指示剂蛋白是在其中转导神经元特异性启动子（NSE）下游的Cameleon的。