がん遺伝子産物チロシンキナーゼの酸化的構造修飾による高度活性化の機序と意義

癌基因产物酪氨酸激酶氧化结构修饰高活化机制及意义

• 批准号: 13216045
• 负责人: 中島 泉
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216045/
• 关键词: RET; チロシンキナーゼ; 酸化ストレス; 紫外線; システイン残基; 重金属ストレス; 国際情報交換; アメリカ

がん遺伝子RETの産物RETチロシンキナーゼがキナーゼドメイン上の特定システインの酸化による構造修飾によって高度活性化し、そのことががんの増殖と悪性転化にかかわることを示唆する以下の研究成果を得た。c-RETのCys987あるいはRET-PTC-1のCys376をアラニンに置換すると、RETの酵素活性が著しく低下するとともに、紫外線や浸透圧ストレスに応答して活性化する特質が失われた。しかしこの場合には、RETの基本的な分子構造が不安定となることから、システインのSH基の酸化還元以外の要因の関わりも否定できなかった。そこでこのシステインをグリシンやセリンに置換したミュータントを新たに作製して、内在性活性のレベルと酸化的ストレスへの応答性を調べた。その結果、これらのアミノ酸の置換によっては分子の不安定性は検出されず、それにもかかわらず、内在性活性のレベルと紫外線に対する応答性は著しく低下することが判明した。現在、GSTタグを導入したRET蛋白をバキュロウイルスに導入して精製した大量のRET蛋白を用いて、質量分析機によるマススペクトメトリーによりさらに詳細な解析を進めている。一方、酸化ストレスにより高度活性化するRETの下流のがんの増殖と悪性転化にかかわるシグナル経路を、RETを導入したNIH3T3細胞において解析し紫外線で活性化したRETの下流でERKやJNKなどのMAPキナーゼが活性化することが示され、その下流でMMP-2の発現増強がおこることが示唆された。RET上流のシグナル伝達に関しては、重金属やカルボニル化合物によって細胞表面受容体が架橋されると、膜のラフトの働きに依存して活性酸素がつくられることを示した。このラフトの働きに関連する遺伝子を分離し、現在機能の解析を進めている。

The following research results were obtained by structural modification of RET products such as RET, RE Cys987 of c-RET and Cys376 of RET-PTC-1 are replaced by RET, and the enzyme activity of RET is reduced. The characteristics of UV and UV penetration are lost. In this case, the basic molecular structure of RET is unstable, and the main factors other than acidification are negative. A new method of controlling the activity of the enzyme is proposed, and the activity of the enzyme is regulated. As a result, the molecular instability of the molecule was found to be low, and the intrinsic activity of the molecule was found to be low. Now, GST is introduced into the RET protein, and a large number of RET proteins are introduced and refined. In one aspect, the expression of MMP-2 in the downstream of ERK, JNK and MAP was increased due to the introduction of RET into NIH 3T3 cells. RET up-stream chemical reactions are related to heavy metals, heavy metal compounds, and active acids. The analysis of the current function of the system is carried out in the following ways:

项目成果

Kato, M.: "Repair by Src Kinase of Function-Impaired RET-MEN2A with Mutations at Tyrosines in the Carboxyterminal Kinase Domain"Cancer Res.. (in press). (2002)

Kato, M.：“通过 Src 激酶修复功能受损的 RET-MEN2A，其羧基末端激酶结构域中的酪氨酸发生突变”Cancer Res..（出版中）。

吉川敏一(編集): "酸化ストレス-フリーラジカル医学生物学の最前線"医歯薬出版. 326 (2001)

Toshikazu Yoshikawa（编辑）：“氧化应激 - 自由基医学生物学的前线”石药出版 326（2001）。

Takeda, K.: "Osmotic stress-mediated activation of RET kinases involves intracellular disulfide-bonded dimer formation"Antioxidants & Redox Signaling. 3. 473-482 (2001)

Takeda, K.：“渗透压介导的 RET 激酶激活涉及细胞内二硫键二聚体的形成”

Kato, N.: "RET tyrosine kinase enhances hair growth in association with promotion of melanogenesis"Oncogene. 20. 7536-7541 (2001)

Kato, N.：“RET 酪氨酸激酶增强毛发生长并促进黑色素生成”癌基因。

Nakashima, I.: "Redox-linked signal transduction pathway for protein tyrosine kinase activatio"Antioxidants & Redox Signaling. (in press). (2002)

Nakashima, I.：“蛋白酪氨酸激酶激活的氧化还原相关信号转导途径”