ペプチド核酸を用いる遺伝子治療の開発研究

利用肽核酸进行基因治疗的研究与开发

• 批准号: 13218006
• 负责人: 根東 義則
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218006/
• 关键词: ペプチド核酸; 遺伝子治療; 固相反応; 細胞膜透過性; コンビナトリアル合成; がん治療; スペサー; ベクター

PNAの合成についてはすでに多くの報告があり、技術的にはかなり確立されているが、固相合成に関する検討は未だ不十分であり、ハイスループットにPNAを供給する効率的なシステムを構築する必要がある。特に様々な塩基配列のPNAを合成するためには、自動合成機の利用が将来的に必要不可欠となるものと考えられるので、本研究においては特に固相合成を用いるPNA合成の自動合成についてまず検討した。本研究者はヘテロ環化合物を中心とした生理活性小分子の固相自動合成について、ACT496という合成機を用いて検討しており、技術的には対応可能であったが、まだ細部においては最適化が必要である。固相合成については、修飾核酸に関連してデアザプリンのモデルとしてインドール誘導体の合成研究も行った。また、合成機を用いずにより簡便に合成するためにマルチピン法を用いるPNA合成法の検討も行なっている。また蛍光プローブであるFITCを分子内に導入して、その細胞内への取り込みを正確にモニターする方法について検討し、PNAの細胞膜の透過性を評価するために有用であることが明らかとなった。生理機能の評価はまだ予試験段階であるが、HEK細胞(ヒト胎児腎細胞由来細胞株)に修飾核酸キュウーオシンの合成酵素HuTGTをコードする遺伝子のアンチセンスおよびセンスの細胞内への導入を検討し、蛍光顕微鏡下でFITCの蛍光をもとに透過性の評価と生理機能解析を行なっている。いずれも細胞膜を透過しにくい傾向が見られたため、細胞内への核酸導入試薬であるFuGENE6とともに処理し改善が見られた。さらに標的タンパクの発現抑制およびPNAの細胞毒性の評価を行なっている。細胞株の種類によってPNAの透過性が異なることが予想されるため他の細胞についても検討を行なった。

PNA の synthetic に つ い て は す で に more く の report が あ り, technology of に は か な り establish さ れ て い る が, solid phase synthesis に masato す る beg は 検 not だ not very で あ り, ハ イ ス ル ー プ ッ ト に PNA を supply す る sharper rate な シ ス テ ム を build す る necessary が あ る. Trevor に others 々 な salt base with column の PNA を synthetic す る た め に は machine, automatic synthesis の using が に necessary in the future do not owe と な る も の と exam え ら れ る の で, this study に お い て は, に solid-phase synthesis を with い る PNA synthesis の automatic synthesis に つ い て ま ず beg し 検 た. The researchers は ヘ テ ロ を center ring compounds と し た physiologically active small molecules の solid-phase automatic synthesis に つ い て, ACT496 と い う composite machine を い て beg し 検 て お り, technology of に は 応 seaborne may で あ っ た が, ま だ detail に お い て は optimization が necessary で あ る. Solid-phase synthesis に つ い て は, modified nucleic acid に masato even し て デ ア ザ プ リ ン の モ デ ル と し て イ ン ド ー ル inductor の synthesis も line っ た. を use い ま た, synthetic machine ず に よ り simple に synthetic す る た め に マ ル チ ピ を ン method with い る PNA synthesis の 検 line for も な っ て い る. ま た 蛍 light プ ロ ー ブ で あ る FITC を intramolecular に import し て, そ の intracellular へ の take り 込 み を right に モ ニ タ ー す る method に つ い て beg し 検, PNA の の cell membrane permeability を review 価 す る た め に useful で あ る こ と が Ming ら か と な っ た. Physiology の review 価 は ま だ to test Duan Jie で あ る が, HEK cells (ヒ ト tire where renal cell origin cell lines) に modified nucleic acid キ ュ ウ ー オ シ ン の synthetic enzyme HuTGT を コ ー ド す る heritage 伝 son の ア ン チ セ ン ス お よ び セ ン ス の intracellular へ の import を beg し 検, 蛍 顕 light microscopically で FITC の 蛍 light を も と に permeability 価 の assessment Youdaoplaceholder0 Physiological function analysis を line なって る る. い ず れ も を cell membrane through し に く い tend to see が ら れ た た め, intracellular へ の nucleic acid import try 薬 で あ る FuGENE6 と と も に 処 see Richard し improve が ら れ た. The さらに target タ タ パ パ タ タ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> has inhibitory effect on およびPNA and <s:1> cytotoxicity <s:1>. The evaluation is 価を and なって る る. Types of cell lines の に よ っ て PNA の permeability が different な る こ と が to think さ れ る た め he の cells に つ い て も 検 line for を な っ た.

项目成果

K.Yamazaki, Y.Kondo: "Palladium-Catalyzed Synthesis of Indole-3-carbokylates on a Solid Polymer Support"J.Comb.Chem.. (in press). (2002)

K.Yamazaki、Y.Kondo：“在固体聚合物载体上钯催化合成吲哚-3-羧酸酯”J.Comb.Chem..（印刷中）。

K.Yamazaki, Y.Kondo: "Immobilized a-diazophosphonoacetate as a versatile key precursor for palladium catalyzed indole synthesis on apolymer support"Chem. Comm.. 210-211 (2002)

K.Yamazaki，Y.Kondo：“固定化的重氮膦酰基乙酸盐作为钯催化吲哚合成在聚合物载体上的多功能关键前体”Chem。