ペプチド核酸を用いる遺伝子治療の開発研究

利用肽核酸进行基因治疗的研究与开发

基本信息

批准号：
13218006
负责人：
根東義則
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

PNAの合成についてはすでに多くの報告があり、技術的にはかなり確立されているが、固相合成に関する検討は未だ不十分であり、ハイスループットにPNAを供給する効率的なシステムを構築する必要がある。特に様々な塩基配列のPNAを合成するためには、自動合成機の利用が将来的に必要不可欠となるものと考えられるので、本研究においては特に固相合成を用いるPNA合成の自動合成についてまず検討した。本研究者はヘテロ環化合物を中心とした生理活性小分子の固相自動合成について、ACT496という合成機を用いて検討しており、技術的には対応可能であったが、まだ細部においては最適化が必要である。固相合成については、修飾核酸に関連してデアザプリンのモデルとしてインドール誘導体の合成研究も行った。また、合成機を用いずにより簡便に合成するためにマルチピン法を用いるPNA合成法の検討も行なっている。また蛍光プローブであるFITCを分子内に導入して、その細胞内への取り込みを正確にモニターする方法について検討し、PNAの細胞膜の透過性を評価するために有用であることが明らかとなった。生理機能の評価はまだ予試験段階であるが、HEK細胞(ヒト胎児腎細胞由来細胞株)に修飾核酸キュウーオシンの合成酵素HuTGTをコードする遺伝子のアンチセンスおよびセンスの細胞内への導入を検討し、蛍光顕微鏡下でFITCの蛍光をもとに透過性の評価と生理機能解析を行なっている。いずれも細胞膜を透過しにくい傾向が見られたため、細胞内への核酸導入試薬であるFuGENE6とともに処理し改善が見られた。さらに標的タンパクの発現抑制およびPNAの細胞毒性の評価を行なっている。細胞株の種類によってPNAの透過性が異なることが予想されるため他の細胞についても検討を行なった。

尽管已经有许多关于PNA合成的报道，但在技术上已经建立了良好的研究，但有关固相合成的研究仍然不足，并且有必要建立一个有效的系统，该系统将PNA提供给高通量。特别是，为了合成各种碱基序列的PNA，将来将使用自动合成器的使用至关重要，因此在这项研究中，首先检查了使用固相合成的PNA合成自动合成。该研究人员一直在研究使用称为ACT496的合成机器的生物活性小分子（主要是杂环化合物）的自动固相合成，这在技术上是可能的，但仍需要详细详细进行优化。关于固相合成，还将吲哚衍生物的合成研究作为deazapurine与改性核酸相关的模型。此外，我们还使用Multipin方法研究了PNA合成方法，以使无需使用合成器即可更容易合成。此外，我们研究了一种将FITC（荧光探针）引入分子的方法，并准确监测其对细胞的摄取，发现它可用于评估PNA细胞膜的渗透性。尽管生理功能评估仍处于初步阶段，但我们已经研究了对修饰的核酸cuosin的合酶HUTGT的反义和基因的引入，基于渗透性和物理功能分析，cy cy cy cy cy cy cy cy cy culiestion cy culiestion cy cy extimention cy eartimention cy cy clienciper In Cluorce climentuction in Cluore a filcentume a climentimenciply的核酸细胞（细胞系）（细胞系）。两者均显示出渗透细胞膜的可能性较小的趋势，因此在用核酸转移试剂Fugene6治疗时观察到改善。此外，对靶蛋白表达的抑制作用和PNA细胞毒性的评估也进行了。正如预期的那样，PNA的渗透性将根据细胞系的类型而有所不同，还检查了其他细胞。