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ガン細胞特異的に抑制機能を発現する次世代アンチセンス分子の創製

创建在癌细胞中特异性表达抑制功能的下一代反义分子

基本信息

批准号：
13218070
负责人：
和田健彦
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218070/
关键词：
アンチセンス分子ガン特異的機能制御 pH制御 m-RNA p53 PRNA 遺伝子情報発現制御

项目摘要

本研究は現在次世代の遺伝子治療として注目されている「見えないガンに対する遺伝子治療法」に資するため、「ガン細胞特異的に抑制機能を発現する次世代のアンチセンス分子の創製」を目指し、私が提案しているアンチセンス機能の積極的な動的制御機能を有するペプチドリボ核酸(PRNA)を用い、ガン細胞内の低pHを外部因子としガン細胞でのみアンチセンス機能を発現する次世代のアンチセンス分子開発に関する検討を行った。ペプチドリボ核酸(PRNA)のモノマーのN末をFmoc化することにより固相合成法への適用を可能とし、半自動固相合成機によりp53ガン抑制遺伝子変異型の変異領域12塩基配列をターゲットとしたPRNA12量体を合成し、ホウ酸エステル形成に伴うコンホメーション・塩基配向制御についてUV・CD・NMR NOEスペクトルにより検討した。通常のリン酸緩衝液中では天然核酸と同じくanti配向を優先するのに対し、0.2mMのホウ砂を添加することにより効率よくsyn配向に配向変化し、外部因子による塩基部配向制御が可能であることが明らかとなった。さらにターゲットRNAとの相互作用をUVスペクトルの連続変化法により検討した結果、1:1の安定な錯体を形成することが明らかとなった。錯体の安定性について融解温度(Tm)を指標として検討した結果、p53変異型をターゲットとしたPRNA12量体はpH7.2では天然型の相補的なDNA・RNA錯体のTmより15℃も安定な錯体を形成することが明らかとなり、35℃においてはp53正常型とは錯体を形成しないことも示されPRNAがガン遺伝子をターゲットとしたアンチセンス分子として優れた特性を有することが明らかとなった。さらに系のpHを6.2に調整すると全く錯体を形成しないことが明らかとなり、pHによりアンチセンス機能のon-off制御が可能であることを実証した。

This study focuses on the current next generation of otaku treatment method. , "Creation of the next-generation のアンチセンス molecule with the specific inhibitory function of ガン cells", private proposal of しているアンThe active control function of チセンスfunction is the use of するペプチドPRNA, and the low pH inside ガンcells Part of the element of the cell is the function of the next generation of the next generation of molecules. PRNA nucleic acid (PRNA) のモノマーのN-final をFmocization することによりsolid The phase synthesis method is applicable and possible, and the semi-automatic solid phase synthesis machine P53 suppresses genetic variation. Type の変different field 12 base arrangement をターゲットとしたPRNA12 volume を synthesis し, ホウ acidエステル Formation and management of UV・CD・NMR NOEスペクトルにより検した. Normally, the natural nucleic acid and the anti-alignment of the natural nucleic acid buffer are given priority and 0.2mM of the natural nucleic acid is added. The efficiency of とによりよくsyn alignment and the alignment change of し, the external factor による塩base alignment control and the possibility of であることが明らかとなった.さらにターゲットRNAとのInteractionをUVスペクトルの连続剉化法によThe result of the り検検した, the 1:1 stable and stable body を formed the することが明らかとなった. The result of the melting temperature (Tm) of the melting temperature (Tm) of the different body stability, p53 special type P RNA12 volume pH7.2 natural type complementary DNA・RNA misbody 15℃ stable misbody Formation of することが明らかとなり, 35℃ においてはp53 normal type of とは mistaken body をformation of しないこともshow されPRN Aがガン伝子をターゲットとしたアンチセンス分子として优れたcharacteristicsを有することが明らかとなった.さらにsystemのpHを6.2にadjustedするとall-in-one wrong bodyをformationしないことが明らかとなり, pH によりアンチセンスfunctional のon-off control がpossible であることを実证した.