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ヘパラナーゼ阻害剤探索系の構築と活性化機構の解析

乙酰肝素酶抑制剂搜索系统构建及激活机制分析

基本信息

批准号：
13218141
负责人：
清水史郎
金额：
$ 4.93万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218141/
关键词：
ヘパラナーゼヘパラン硫酸 mRNA DNAメチル化プロテインキナーゼC

项目摘要

本年度は、1.ヘパラナーゼ阻害剤探索系の構築、2.構築したアッセイ系を利用した阻害剤の同定、3.ヘパラナーゼmRNAの発現機構の解析、および4.ヘパラナーゼタンパク質の安定化、に関して検討を行った。1.ヘパラナーゼ阻害剤探索系の構築:HepG2細胞にヘパラナーゼ遺伝子を遺伝子導入した細胞を樹立し、その細胞抽出物を酵素源、市販のヘパラン硫酸を基質としてヘパラナーゼ阻害剤探索系の構築を行った。2.構築したアッセイ系を利用した阻害剤の同定:上記アッセイ系を利用して、微生物二次代謝産物を用いたスクリーニングを行った結果,ヘパラナーゼ阻害剤としてRK-682を単離した。RK-682はin vitroにおいて約10μMの濃度でヘパラナーゼ活性を阻害した。また、ケミカル・ライブラリーを用いたスクリーニングでは4つの化合物がヘパラナーゼ阻害活性を示した。3.ヘパラナーゼmRNAの発現機構の解析:ヘパラナーゼの発現は正常組織で低く、がん組織で亢進している。様々な検討を行った結果,DNAのメチル化がヘパラナーゼの発現調節に間接的に関与していることを明らかにした。つまり、正常組織において、ある遺伝子のプロモーター領域がメチル化されているため、結果的にヘパラナーゼの発現が抑えられているが、がん組織においてはこのメチル化の程度が低いためにヘパラナーゼ遺伝子の発現が亢進している可能性が示唆された。4.ヘパラナーゼタンパク質の安定化:様々なタンパク質の安定化に関与しているプロテインキナーゼC(PKC)に着目し,ヘパラナーゼタンパク質の安定化に対する影響を検討した。その結果,PKC活性化剤のTPA処理によりヘパラナーゼタンパク質の安定化が誘導され、PKC阻害剤処理でヘパラナーゼタンパク質の減少が誘導された。

This year, we conducted the following research: 1. Construction of a novel inhibitor system; 2. Identification of an inhibitor system; 3. Analysis of an mRNA expression mechanism; 4. Stabilization of an inhibitor system; and 4. Related research. 1. Construction of a novel inhibitor discovery system: HepG2 cell culture system was constructed by introducing a gene into HepG2 cells, and cell extracts were constructed by enzyme source, market, and sulfuric acid substrate. 2. Construction of a system for the use of the same inhibitor: on the record of the use of the system, microbial secondary metabolites in the use of the same inhibitor results in the use of RK-682 isolated RK-682 inhibits activity at concentrations of about 10μM in vitro. 4. The compound has been shown to be resistant to harmful activity. 3. Analysis of mRNA expression mechanism: mRNA expression in normal tissues is low, mRNA expression in normal tissues is high. As a result of this study,DNA transformation is indirectly related to the development of DNA. In the case of normal tissue, the probability of occurrence of the gene is increased, and the probability of occurrence of the gene is increased. 4. The influence of different parameters on the stability of quality is discussed. As a result, the PKC activator TPA treatment induced the stabilization of the protein, and the PKC inhibitor treatment induced the reduction of the protein.