膜蛋白質DRAP27のジフテリア毒素受容体および毒素の細胞内侵入における役割

膜蛋白 DRAP27 在白喉毒素受体和毒素进入细胞中的作用

• 批准号: 04670262
• 负责人: 目加田 英輔
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670262/
• 关键词: ジフテリア毒素; リセプター; DRAP27; CD9; 発現クローニング

本研究の目的は、ジフテリア毒素リセプターアソシエートタンパク質DRAP27の役割を解析することである。そのために、Vero細胞で作製したcDNAライブラリーから、発現クローニング法によってDRAP27cDNAのクローニングを行い、以下の事を明らかにした。1.得られたDRAP27cDNAの塩基配列を解析したところ、DRAP27は細胞膜を4回貫通した膜タンパク質であること、DRAP27が血小板等の抗原として知られているCD9のモンキーホモローグであることが解った。2.DRAP27がジフテリア毒素感受性やジフテリア毒素の細胞への結合に関与するかどうかを調べるために、クローニングしたcDNAをDRAP27を発現していないがジフテリア毒素に弱く感受性であるヒトーマウス雑種細胞(3279-10細胞)にトランスフェクションして、その効果を調べた。その結果、DRAP27は3279-10細胞の細胞表面のジフテリア毒素リセプター数を約10倍増加させ、毒素感受性を約30倍高めることが解った。一方ジフテリア毒素リセプターを持たないマウスL細胞にDRAPを発現させた場合には、毒素感受性や結合に何の効果ももたらさなかった。これより、DRAP27自体はジフテリア毒素に対する結合性を持たないが、細胞表面のジフテリア毒素リセプター数を著しく増加させる働きがあり、これによって細胞の毒素感受性を高めることが解った。3.DNAおよびタンパク質のホモロジー検索を行った結果、DRAP27にホモロジーがあるタンパク質9種類が見つかった。これらのタンパク質は全て膜を4回貫通する特徴的な構造をしており、新しい膜タンパク質ファミリーを形成しているものと思われる。

The purpose of this study is to analyze the activity of the toxin DRAP27. The following is a summary of the results obtained from the analysis of the DRAP27 cDNA sequence: 1. The gene sequence of DRAP27 cDNA was analyzed. DRAP27 cDNA was inserted into the cell membrane four times. DRAP27 cDNA was inserted into the membrane four times. 2. DRAP27 was found to be sensitive to the toxin and associated with the binding of the toxin to cells (3279-10 cells). As a result, the number of toxins on the cell surface of DRAP27 - 3279-10 cells increased by about 10 times, and the sensitivity of toxins increased by about 30 times. A new type of toxin is produced in the cell. The number of cells on the surface of the cell increases with the increase of the sensitivity of the cell to the toxin. 3. DNA The structure of the film is characterized by four cycles of penetration, and the new film is characterized by four cycles of penetration.

项目成果

Tsuneoka,M.: "Degradation of a nuclear-localized protein in mammalian COS cells using Escerichia coli β-galactosidase as a model protein." J.Biol.Chem.267. 9107-9111 (1992)

Tsuneoka, M.：“使用大肠杆菌 β-半乳糖苷酶作为模型蛋白降解哺乳动物 COS 细胞中的核定位蛋白。”J.Biol.Chem.267 (1992)。

Mitamura,T.: "The 27-kD diphtheria toxin receptor-associated protein(DRAP27) from Vero cells is the monkey homologue of human CD9 antigen:Expression of DRAP27 elevates the number of diphtheria toxin receptors on toxin-sensitive cells." J.Cell Biol.118. 13

Mitamura,T.：“来自 Vero 细胞的 27-kD 白喉毒素受体相关蛋白 (DRAP27) 是人类 CD9 抗原的猴子同源物：DRAP27 的表达会增加毒素敏感细胞上白喉毒素受体的数量。”