2本鎖RNAに対する宿主応答機構の解析

宿主对双链RNA的反应机制分析

• 批准号: 13226082
• 负责人: 松本 満
• 金额: --
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226082/
• 关键词: 2本鎖RNA; RNAi; 自然免疫; 宿主応答機構; シグナル伝達機構

一般に、哺乳類で2本鎖RNA(double-stranded RNA : dsRNA)interference(RNAi)を誘導することは困難であるが、少なくともマウス初期胚ではRNAiの存在が確認されている。また、ごく最近、導入するdsRNAを22bpと短くすると(short interfering RNA : siRNA)、哺乳類でも有意にRNAiが誘導できることが見い出された。これら長さの異なるdsRNAに対する細胞応答機構の違いに着目し、RNAiと免疫系の調節機構という2つの現象を自然免疫における宿主応答機構の多様性と捉え、両者の関連性と、その意義について検討を試みた。すなわち、レポーター遺伝子であるluciferase遺伝子とともに、完全長あるいは22bpのluciferase遺伝子のdsRNAをlipofection法を用いて哺乳動物培養細胞に導入し、luciferase活性の測定により、高感度にRNAiを検出できる実験系を構築した。その結果、完全長のluciferase dsRNA、あるいはpolyI : Cを導入した場合には、導入細胞において強い傷害が観察され、その際、luciferase活性の特異的な低下、すなわちRNAi効果は微弱であった。これに対して、luciferase遺伝子に対応するsiRNAを細胞内に導入した場合には細胞傷害の程度は弱く、luciferase活性の特異的な低下、すなわちRNAi効果が顕著に認められた。以上の結果から、長いdsRNAの場合と異なり、siRNAは、おそらくPKR(dsRNA-dependent protein kinase)とeIF-2a(eukaryotic translation initiation factor2)を介した細胞傷害作用の弱いことが、哺乳動物細胞においても高いRNAi効果を発揮しうる一因であると考えられた。今後は、dsRNAの認識から、RNAiあるいは免疫系の調節作用といった多様な細胞応答に至る個々のシグナル伝達機構を解析する予定である。

In general, mammals have difficulty in inducing double-stranded RNA(dsRNA)interference(RNAi). 22bp short interfering RNA (siRNA), mammalian RNAi intentionally induced The diversity of host response mechanisms, the relevance of dsRNA, and the significance of RNAi are discussed in this paper. The method of lipofection for dsRNA of 22bp luciferase gene was used to introduce into mammalian cultured cells, measure luciferase activity, detect RNAi with high sensitivity and construct RNAi system. As a result, the complete length of luciferase dsRNA, polyI : C, was introduced into the cells. When the cells were introduced into the cells, the strong damage was detected. When the cells were introduced into the cells, the luciferase activity was specifically reduced. The RNAi effect was weak. In this case, if siRNA is introduced into the cell, the degree of cell injury is weak, and the specific decrease of luciferase activity is recognized. The above results are different from those of long dsRNA, siRNA, PKR(dsRNA-dependent protein kinase) and eIF-2a(eukaryotic translation initiation factor2). In the future, dsRNA understanding, RNAi, immune system regulation, multiple cellular responses, and analysis of multiple cellular mechanisms will be discussed.

项目成果

Matsushima, A. et al.: "Essential role of NF-κB-inducing kinase and IκB-kinase α in NF-κB activation through lymphotoxin-β receptor, but not through TNF receptor-I"Journal of Experimental Medicine. 193(5). 631-636 (2001)

Matsushima, A. 等人：“NF-κB 诱导激酶和 IκB 激酶 α 在通过淋巴毒素-β 受体而非 TNF 受体-I 激活 NF-κB 中的重要作用”《实验医学杂志》193(5)。 ）631-636（2001）。