自己免疫および真菌感染の成立機構の両者に働く遺伝子の機能解析

自身免疫相关基因的功能分析及真菌感染建立机制

• 批准号: 15019070
• 负责人: 松本 満
• 金额: $ 3.58万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019070/
• 关键词: AIRE; 自己免疫疾患; 胸腺; PHD; ユビキチン

AIRE (autoimmune regulator)は遺伝性の自己免疫疾患APECEDの原因過伝子である。AIREは胸腺髄質上皮細胞に強く発現していることから、自己寛容の成立過程に重要な役割をはたすと考えられるが、そのメカニズムについては不明な点が多い。本研究ではAIREが2つのPHDドメインをもつことに着目し、E3 ligaseとしてのAIREの機能を解析した。すなわち、AIREの2つのPHD fingerドメイン(PHD1およびPHD2)についてGST融合蛋白を作製し、in vitro ubiquitylation assayを行った。その結果、N末側のPHDドメイン(PHD1)がE3 ligase活性をもつことが明らかになった。PHD1によるAIREのE3 ligase活性は、バキュロウィルス発現系を用いて作製したAIRE全長蛋白でも確認した。次いでAIREのE3 ligase活性とAPECED発症との関連を検討する目的で、APECED症例で報告されているPHD1 missense mutant (C311YおよびP326Q)を作製し、in vitro ubiquitylation assayを行ったところ、これらのdisease mutantでは野生型AIREと比較しE3 ligase活性が著明に減弱していた。これい対して、PHD1 disease mutantのGal4-binding assayによる転写活性化能は野生型と差異を認めなかった。Disease mutantであるC311YおよびP326QでE3 ligase活性が減弱していることから、AIREのE3 ligase活性が自己寛容の成立過程に重要な役割をはたしていることが示唆され、今後はAIREによってユビキチン化される基質の同定が重要な課題と思われる。

AIRE (autoimmune regulator) is the cause of immune disease APECED. AIRE thymic epithelial cells are strongly expressed in the cytoplasm, and the formation of thymic cells is important for the development of thymic epithelial cells. In this study, we analyzed the function of AIRE by E3 ligase. The PHD finger (PHD1 and PHD2) of AIRE and GST fusion protein is used in vitro ubiquitylation assay. As a result, PHD on the N terminal side (PHD1) increases E3 ligase activity. The E3 ligase activity of AIRE at PHD1 was confirmed by the use of the AIRE full-length protein in the production of the Bancroitulus discovery system. The E3 ligase activity of AIRE was significantly decreased in comparison with wild-type AIRE when PHD1 missense mutant (C311Y and P326Q) was detected in APECED cases. The Gal4-binding assay of PHD1 disease mutant was used to identify the difference between wild type and active gene. Disease mutant C311Y and P326Q E3 ligase activity decreased, AIRE E3 lig

项目成果

Kajiura F, et al.: "NF-κB-inducing kinaseestablishes self-tolerance in a thymic stroma dependent manner"Journal of Immunology. 172. 2067-2075 (2004)

Kajiura F 等人：“NF-κB 诱导激酶以胸腺基质依赖性方式建立自我耐受”《免疫学杂志》172. 2067-2075 (2004)。

Uchida D, et al.: "AIRE functions as an E3 ubiquitin ligase"Journal of Experimental Medicine. 199. 167-172 (2004)

Uchida D 等人：“AIRE 具有 E3 泛素连接酶的功能”《实验医学杂志》。

Minami, A. et al.: "Increased insulin sensitivity and hypoinsulinemia in APS knockout mice."Diabetes. 52. 2657-2665 (2003)

Minami, A. 等人：“APS 基因敲除小鼠的胰岛素敏感性增加和低胰岛素血症。”糖尿病。