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新たに発見したPAプロテアーゼを標的とした抗インフルエンザウイルス薬の開発

开发针对新发现的PA蛋白酶的抗流感病毒药物

基本信息

批准号：
13226126
负责人：
原好勇
金额：
--
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.インフルエンザウイルスRNAポリメラーゼ・PAサブユニットに存在するプロテアーゼ活性が、ウイルス複製にどのような役割を果たしているか明らかにするため、まず、ウイルス遺伝子の転写・複製に本活性が必須であるかどうか解析を行った。細胞内でPA、PB1、PB2、NPをそれぞれ発現させ、またNS遺伝子の5'および3'末端非翻訳領域の間にCAT遺伝子を挿入し、polIプロモーター下でRNAを合成させ、インフルエンザウイルスのモデルRNP(核タンパク質複合体)を再構成させる系で実験を行った(Brownlee G.G. et al.,Oxford Univ.との共同研究)。その結果、PAのプロテアーゼ活性部位を他のアミノ酸へ置換(S624A)しても、mRNA、cRNA、vRNAの合成に影響は見られなかった。さらに、リバースジェネティクス法により、PAプロテアーゼ活性部位を欠失したノックアウトウイルスを作成し、培養細胞でのウイルス増殖能について調べたが、wild typeとの間に、大きな差は見られなかった。今のところ、培養細胞レベルでは、PAのプロテアーゼ活性は、ウイルス増殖には必須ではないだろうと考えている。現在、個体レベルにおけるウイルスの増殖や病原性、宿主の免疫応答などへの関与について解析を行っている。2.PAと相互作用する因子について解析を行ったところ、PAはインフルエンザウイルスのマトリックスタンパク質・M1と相互作用することが分かった。お互いに精製したPAとM1を用いて、プルダウンアッセイ、ウェスト・ウェスタンブロッティングを行ったところ、PA-M1間の結合が検出された。さらに、PAのプロテアーゼ活性は、Suc-LLVY-MCAを用いる試験管内の系において、M1の添加により阻害されることが分かった。M1がPAに結合して立体障害を引き起こすことでプロテアーゼ活性を阻害することが推測された。

1. In this case, you need to make sure that you need to make a copy of the data. In this case, you have to make sure that you need to make a copy of this activity. In this case, you have to make sure that you can make a copy of this activity. You must make a copy of this activity. In the cell, PA, PB1, PB2, NP, NP, CAT, NS, polI, NS, CAT, RNP, Brownlee, RNP, Brownlee, GPG, et al.,Oxford Univ. Joint research). The results showed that the active parts of PA were synthesized by adding (S624A) acid, mRNA, cRNA and vRNA. The results showed that the active parts of the active parts were damaged, and the active parts were isolated from the active parts of the active parts, the active parts of the active parts, the active parts and the active parts. Today, you need to learn more about the activity of your cell, the activity of your PA, and your ability to colonize your body. At present, the pathogenicity of colonization and the immunity of the host should be analyzed and analyzed. 2.PA interactions, factors, parses, rows, interactions, interactions. Please contact each other for PA M1. You can use the following information: one, the other, the PA-M1, the other. Make sure that you don't know what to do, PA what you want to do, what's more, what's more, you can use Suc-LLVY-MCA to make sure that you don't know what's going on in the tube, and M1 is going to add something to prevent the damage. The combination of M1 PA and stereoscopic damage has led to a significant increase in the activity of blocking damage.