ユビキチン/プロテアソーム系とαBクリスタリンの細胞内動態の関連について

关于泛素/蛋白酶体系统与αB晶状体蛋白细胞内动力学的关系

• 批准号: 13771407
• 负责人: 伊東 秀記
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771407/
• 关键词: クリスタリン; 封入体; Hsp27; ユビキチン; ミオパシー; ストレス蛋白質; リン酸化

デスミンミオパシーを発症するフランスの一家系で、低分子量ストレス蛋白質であるαBクリスタリンの変異(R120G)が報告されている。これまでにR120GαBクリスタリン変異体の性質について、主に組換え蛋白質を用いた解析はされているが、哺乳動物細胞内での性質に関してはあまり検討されていない。本研究では、R120GαBクリスタリンの細胞内での性質を、細胞内蛋白質品質管理機構として代表的なユビキチン/プロテアソーム系と分子シャペロン系との関連を含めて解析した。HeLa細胞で野生型αBクリスタリン(wt-αB)あるいはR120GαBクリスタリン(R120GαB)を一過性に発現させ、その発現様式をウェスタンブロットで解析したところ、wt-αBは主に可溶性画分に分布していたがR120GαBは主に不溶性画分に分布していた。また、免疫染色を行い、顕微鏡観察すると、R120GαBを発現させた細胞のうち15-25%で細胞質に存在する複数の封入体様構造が観察され、そこにR120GαBは局在していた。wt-αBを発現させた細胞では、このような形態は全く観察されなかった。さらに、この封入体様構造には、Hsp27も共局在していた。私たちは、これまでに、プロテアソーム阻害剤によるアグリソーム形成と低分子量ストレス蛋白質のアグリソームヘの局在を報告しており、今回観察された封入体とアグリソームとの関連について解析したが、R120GαB発現によって観察された封入体に、ビメンチンは局在しておらず、また、ユビキチン化蛋白質も検出されず、アグリソームとは性質が異なる封入体であることが明らかになった。

A family of low molecular weight proteins (αB) and a family of low molecular weight proteins (R120G) are reported. R120G αB is a member of a group of proteins that are related to the properties of different species in mammalian cells. In this study, we analyzed the intracellular properties of R120G αB protein and the relationship between protein quality and molecular quality. HeLa cells are wild-type αB cells (wt-αB) and R120G α B cells (R120G αB). In addition, immunostaining and microscopic examination revealed that R120G αB was present in 15-25% of the cells and that multiple encapsulated structures existed in the cytoplasm. wt-αB is found in cells, and its morphology is completely observed. The structure of this enclosure is similar to that of Hsp27. In this paper, the relationship between the development of R120G αB and the development of low molecular weight protein is reported. The nature of the enclosure is different.

项目成果

Ito, H.: "Regulation of the levels of small heat shock proteins during differentiation of C2C12 cells"Exp.Cell Res.. 266. 213-221 (2001)

Ito, H.：“C2C12 细胞分化过程中小热休克蛋白水平的调节”Exp.Cell Res.. 266. 213-221 (2001)

Hotta, K.: "The loss of susceptibility to apoptosis in exudated tissue neutrophils is associated with their nuclear factor-kappaB activation"Eur.J.Pharmacol.. 433. 17-27 (2001)

Hotta, K.：“渗出组织中性粒细胞对细胞凋亡敏感性的丧失与其核因子-κB 激活有关”Eur.J.Pharmacol.. 433. 17-27 (2001)

Tanabe, K.: "Contrasting effects of midazolam on induction of heat shock protein 27 by vasopressin and heat in aortic smooth muscle cells"J.Cell.Biochem.. 84. 39-46 (2001)

Tanabe，K.：“咪达唑仑对主动脉平滑肌细胞中加压素和热诱导热休克蛋白 27 的对比作用”J.Cell.Biochem.. 84. 39-46 (2001)

伊東 秀記: "低分子量HSPと細胞内タンパク質凝集体"日本薬理学雑誌. 121. 27-32 (2003)

Hidenori Ito：“低分子量 HSP 和细胞内蛋白质聚集体”日本药理学杂志 121. 27-32 (2003)。

Ito, H.: "Inhibition of proteasomes induces accumulation, phosphorylation and recruitment of HSP27 and αB-crystallin to aggresomes"J.Biochem.. (印刷中).

Ito, H.：“蛋白酶体的抑制会诱导 HSP27 和 αB-晶状体蛋白的积累、磷酸化和聚集到聚集体”J.Biochem..（出版中）。