CTDホスファターゼFCP1によるRNAポリメラーゼIIの制御機構の解析

CTD磷酸酶FCP1对RNA聚合酶II的调控机制分析

• 批准号: 13780563
• 负责人: 木村 誠
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780563/
• 关键词: RNAポリメラーゼII; 転写因子; ホスファターゼ; エピトープタグ; RNAポリメラーゼ; リン酸化; 分裂酵母

RNAポリメラーゼII(Pol II)第1サブユニット(Rpb1)のC末端ドメイン(CTD)は、7アミノ酸残基による高度反復配列で構成され、転写サイクルの中で高度リン酸化、脱リン酸化を繰返し受ける。これが最も顕著なPol IIの制御機構である。昨年度までに、Rpb1遺伝子にエピトープタグ配列を導入した分裂酵母株から、Pol II基本転写因子TFIIF、CTDの脱リン酸化を担うホスファターゼFcp1の複合体の単離に成功し、Pol II第4サブユニット(Rpb4)がFcp1をPol IIに結合させ、CTDの脱リン酸化を促進する機能をもつことを明らかにしている。今年度は、1.試験管内転写系でのFcp1-Rpb4相互作用の果たす機能を解析するため、解析に有効な分裂酵母株の抽出液による試験管内転写系の構築を行った。2.Rpb4の機能解析のため、野生型Rpb4の発現停止後に部分欠損をもつ変異Rpb4を発現する酵母株を作製し、変異Rpb4の細胞内での機能を解析した。N及びC末端領域は細胞の生育には不要であるが、C末欠損Rpb4は優勢の生育遅延を見せた。また、致死性変異Rpb4はPol IIへの集合が見られなかった。Rpb4の機能とその作用機構について引き続き解析中である。3.Fcp1遺伝子にエピトープタグ配列をもつ分裂酵母株から、Fcp1を含む新規複合体である可能性の高い蛋白質複合体を単離した。大量精製と構成因子の同定を検討中である。4.酵母細胞内でのFcp1、TFIIF、Pol IIの動態について解析するため、Fcp1、TFIIFの細胞内分子数を定量した。細胞当りPol II-10,000分子に対し、Fcp1-3,500、TFIIF-20,000分子であった。

The C-terminal region (CTD) of the 1st segment of the RNA protein sequence (Rpb1) is highly re-aligned with the 7th segment of the RNA protein sequence II(Pol II). The most important part of the Pol II control mechanism. In the past year, Rpb1 gene sequence was introduced into the yeast cell, Pol II basic transcription factor TFIIF, CTD deacidification was responsible for the isolation of Fcp1 complex, and Pol II fourth domain (Rpb4) was introduced into Fcp1 and Pol II to promote the function of CTD deacidification. This year, 1. Construction of an in vitro assay system for the functional analysis of Fcp1-Rpb4 interactions. 2. Functional analysis of Rpb4, partial loss after wild-type Rpb4 production stops, production of mutant Rpb4 in yeast strains, and intracellular functional analysis of mutant Rpb4 N and C terminal areas of fertility do not want to see, C terminal damage Rpb4 advantage of fertility delay Rpb4 is a lethal variant of Pol II. Rpb4 function and action mechanism 3. Fcp1 gene is a highly probable protein complex that can be isolated from yeast strains and Fcp1 gene complexes. A large number of refined constituent factors are discussed. 4. Quantitative analysis of Fcp1, TFIIF and Pol II in yeast cells Cells contain Pol II-10,000 molecules, Fcp1-3,500, and TFIIF-20,000 molecules.

项目成果

Makoto Kimura: "Formation of a carboxy-terminal domain phosphatase (Fcp1)/TFIIF/RNA polymerase (pol II) compiex in Schizosaccharomyces pombe involves direct interaction between Fcp 1 and the Rpb4 subunit of pol II"Molecular and Cellular Biology. 22-5. 157

Makoto Kimura：“粟酒裂殖酵母中羧基末端结构域磷酸酶 (Fcp1)/TFIIF/RNA 聚合酶 (pol II) 复合物的形成涉及 Fcp 1 和 pol II 的 Rpb4 亚基之间的直接相互作用”《分子与细胞生物学》。