クローンマウスの作出効率に及ぼすES細胞の分化度の影響

ES细胞分化程度对克隆小鼠生产效率的影响

• 批准号: 13780663
• 负责人: 下澤 律浩
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Central Institute for Experimental Animals
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780663/
• 关键词: クローンマウス; ES細胞; キメラマウス; C57BL; 6J; TT2株

ES細胞をドナー核としたクローンマウス作出の可否とそれらES細胞のキメラマウスの生殖系列への寄与との相関を明らかにする目的で、近郊系C57BL/6J(B6J)マウスから樹立したES様細胞からクローンマウスの作出を検討するとともにその細胞が生殖細胞への分化能を有するかを検討した。クローンマウスの作出は、先の報告と同様に、ES様細胞を単独で培養し、M期に細胞周期を同調したものを除核未受精卵に導入してクローンマウスの作出を行った。また、これと平行してフィーダー細胞上でES様細胞を培養し、ホスト胚であるICRの胚盤胞に注入しキメラマウスの作出を行った。今回用いた6株のES細胞は形態的に若干の差があるものの、AP染色によって全株で未分化状態を維持していることが確認された。また、正常核型の割合は、20-90%の幅にあった。クローンマウスの作出では、6株のES様細胞から構築した胚の桑実胚/胚盤胞への発生率は43.6%(175/401)であり、株ごとの差はあまり見られなかった。胚移植の結果、クローン個体を得ることはできていないが、26.7%(46/172)が着床しており、その内2株から計7つの胎盤のみの形成が確認された。また、キメラの作出については、6株全てからキメラマウスが得られているが、そのキメリズムには10-95%の幅があり、交配試験により2株で生殖細胞への分化が確認された。本研究に用いたES細胞は全株とも比較的形態的な未分化度が維持されていたが、キメラマウスにおける生殖細胞への分化が確認された2株ですらクローンマウスの作出には到らなかった。しかし、胎盤が得られた2株の形態および正常核型の割合は、他のものと比べ比較的高いものであった。このことから、個体の形成には、未分化および正常核型の安定した維持が必要であると考えられた。

ES cells を ド ナ ー nuclear と し た ク ロ ー ン マ ウ ス can make の と そ れ ら ES cells の キ メ ラ マ ウ ス の reproductive series へ の send と の phase masato を Ming ら か に す る purpose で, suburban C57BL / 6 j (B6J) マ ウ ス か ら set し た ES cells others か ら ク ロ ー ン マ ウ ス の make を beg す 検 る と と も に そ が の cells The へ <s:1> differentiation energy of the colonial cells を has する を検 を検 and <s:1> た. ク ロ ー ン マ ウ ス の は, first の report made と with others に, ES cells others を 単 で cultivate し alone, M phase に cell cycle を homology し た も の を denucleation unfertilized egg に import し て ク ロ ー ン マ ウ ス の line make を っ た. ま た, こ れ と parallel し て フ ィ ー ダ ー cells on で ES others を し, ホ ス ト embryo で あ る ICR の blastoderm cell に injection し キ メ ラ マ ウ ス の line make を っ た. This reuse い た 6 strains の ES cells は に in the form of a number of poor の が あ る も の の, AP staining に よ っ て plants で undifferentiated state を maintain し て い る こ と が confirm さ れ た. Youdaoplaceholder0, normal karyotype <s:1> cleavage また, 20-90% <s:1> amplitude にあった. ク ロ ー ン マ ウ ス の make で は, 6 strains の ES cells others か ら build し た の mulberry be embryo-cells/blastoderm cell へ の 発 は birth rate 43.6% (175/401) で あ り, plant ご と の poor は あ ま り see ら れ な か っ た. Embryo transplantation の results, ク ロ ー ン individual を must る こ と は で き て い な い が, 26.7% (46/172) が implantation し て お り, そ の within 2 strains か ら meter 7 つ の placenta の み の form が confirm さ れ た. ま た, キ メ ラ の make に つ い て は, 6 strains of whole て か ら キ メ ラ マ ウ ス が have ら れ て い る が, そ の キ メ リ ズ ム に は 10-95% of の が あ り, mating test に よ り 2 strains で germ cell へ の differentiation が confirm さ れ た. This research に い た ES cells は plants と も comparison form が な undifferentiated degrees maintain さ れ て い た が, キ メ ラ マ ウ ス に お け る germ cell へ の differentiation が confirm さ れ た 2 strains で す ら ク ロ ー ン マ ウ ス の make に は to ら な か っ た. The が of the が and the placenta obtained られた2 strains of <s:1> morphology および normal karyotype <s:1> cut and combined られた, and his と が と と was higher than べ が であった であった であった であった であった であった であった であった であった であった であった であった であった であった であった であった であった であった であった であった. It is necessary to であると study えられた for the formation of <s:1> と ら, the formation of individual <s:1> に, the undifferentiated および normal karyotype <s:1>, the stability of <s:1> た た and the maintenance of が.