液液界面における単一蛍光分子の拡散過程・反応頻度の計測と統計学的評価

单个荧光分子在液-液界面的扩散过程和反应频率的测量和统计评估

基本信息

批准号：
13740422
负责人：
塚原聡
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

約0.14mmという橿葺の水相の上に,安定に有機相をのせられるマイクロセルを,穴をあけたカバーガラスとスライドガラスから作成した。二相系には,ドデカン/水を選択した。Cw-Nd:YAGレーザーの第2高調波(波長532nm,出力5-50mW)をレンズで集光し,直角プリズムを通して界面に約73°の入射角で照射した。この角度は,ドデカン/水界面の臨界角より大きく,界面でレーザー光の全内部反射が見られた。倒立型の蹟微鏡を用いて,下から高開口数(1.4,油浸)の60倍対物レンズを用いて界面からの蛍光を集め,アバランシェフォトダイオード(APD)検出器を用いてフォトンカウンティングを行った。APDの検出部分に直径50μmのピンホールを付け,界面の観測領域を直径830nmに制限した。溶質として,まず蛍光性で界面活性なインドシアニン色素である,1,1'-ジオクタデシル-3,3,3',3'-テトラメチルインドカルボシアニン(Dil)を用いた。得られた結果を統計学的に解析し,単一Dil分子の界面における二次元の拡散係数,蛍光量子収率を評価した。また,数種の界面活性剤(SDSとDMPC)を添加し,それらが単一Dil分子の拡散係数やを蛍光量子収率に及ぼす効果についても検討した。さらに,これらの結果より,界面の粘性率を求めた。また,蛍光性のテトラメチルローダミンでラベルしたタンパク質,コンカナバリンAのドデカン/水界面における二次元拡散や水相からの吸着過程について,単一タンパク質レベルで検討した。それらに及ぼす界面活性剤(AOT)の影讐についても検討を行った。

可以稳定地放置在约0.14毫米的泥土水相中的微型电池是由孔盖板和滑动玻璃制成的。选择十二烷/水作为两相系统。 CW-ND：YAG激光器的第二个谐波（波长532nm，输出5-50MW）由透镜聚焦，并以大约73°的入射角度通过直角棱镜照射到界面。该角度大于十二烷/水界面的临界角度，并且在界面上观察到激光的总内部反射。使用倒的痕量显微镜，使用底部具有高数值光圈（1.4，油浸入）的60倍物镜透镜收集界面的荧光，并使用雪崩光电二极管（APD）检测器进行光子计数。直径为50μm的针孔连接到APD的检测部分，界面处的观察区域限于直径为830 nm。首先，将荧光和表面活性剂吲哚苷染料，1,1'-二二烷基-3,3,3'，3'-四甲基Indramethylindocarbocyanine（DIL）用作溶质。对获得的结果进行统计分析，以评估单个DIL分子界面处的二维扩散系数和荧光量子产率。还添加了几种表面活性剂（SDS和DMPC），以研究它们对单个DIL分子的扩散系数和荧光量子产率的影响。此外，从这些结果中，确定了界面的粘度。此外，在十二烷/水界面和水相在单个蛋白质水平研究了凸藻蛋白A的二维扩散和吸附过程。我们还考虑了表面活性剂（AOT）的阴影复仇。