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人工関節置換術術後の静脈血栓塞栓症発症関連遺伝子と抗凝固薬反応関連遺伝子の同定

关节置换术后静脉血栓栓塞发生和抗凝反应相关基因的鉴定

基本信息

批准号：
20791057
负责人：
塚原聡
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20791057/
关键词：
人工関節静脈血栓ゲノム薬剤反応性疾患感受性

项目摘要

術後VTE発症予測遺伝子およびフォンダパリヌクス反応性関連遺伝子の各候補遺伝子について遺伝子多型解析を行うため、手術患者ほぼ全例にDNA採取に対する協力を求め、同意を得られた患者からはインフォームドコンセントの下にDNA採取を行い、厳格な連結可能匿名化の上で手術データベースと連動させた。アミノ酸非同義置換を起こすSNPは、タンパクの親和性を含めた性質変換の可能性がありGeneCards(http://www.genecards.org/index.shtml)、ExPasy(Expert Protein Analysis System)Proteomics Server(http://us.expasy.org/)データベースを利用して遺伝子のモチーフやトランスクリプトバリアント、タンパク配列と構造を検索し、目的遺伝子の機能解析を行った。エクソン領域のアミノ酸非同義置換を起こすSNPは免疫共沈降法(IP;Immunopr ecipitation assay)により標的分子の親和性を検討した。イントロン領域およびプロモーター領域、5'あるいは3'UTRに存在するSNPは、TESS(Transcription Element Search System)データベースにより転写因子の結合を確認し、TaqMan法を利用したReal-time quantitative PCRによる発現解析、目的のSNPを含有したルシフェラーゼアッセイによるプロモーター活性解析、SNPを含むゲノムDNAとタンパクとの結合を確認するElectrophoretic Mobility Shift Assay(EMSA)の実験を行った。同時に第Xa凝固因子活性の検討のために、標的分子およびATIII、フォンダパリヌクス、Xa、発色基質を同時にインキュベートし、吸光度測定して基質分解を定量化した。また転写活性に関連する領域以外のSNPの場合には遺伝子多型に依存する当施設で採取しているB cell lineのmRNA変異の解析を行った。

Postoperative VTE 発 disease can be survived 伝 son およびフォンダパリヌクス anti 応 sex masato even heritage 伝 child の each alternate but 伝について posthumous son 伝 polymorphism analytical line をうため, surgical patients ほぼ all cases に DNA taken にす seaborne る together をめ, agree to をられた patients からはインフォームドコンセントのに DNA taken under をない, 厳 lattice even The knot may be anonymized. The で surgery デタベタベスとスと is linked to させた. アミノ acid non synonymous substitution を up こす SNP は, タンパクの affinity を containing めた property variations in の possibility があり GeneCards (http://www.genecards.org/index.shtml), ExPasy (Expert Protein Analysis System) Proteomics Server (http://us.expasy.org/) データベースを using して posthumous son 伝のモチーフやトランスクリプトバリアント, タンパクと structure with column を検 cable し, purpose but 伝の line function analytical をった. エクソン field のアミノ acid non synonymous substitution を up こす SNP は immune total settlement method (IP; Immunopr ecipitation assay) により target molecules の affinity を beg し検た. イントロン field およびプロモーター field, 5 'あるいは 3' UTR に exist する SNP は, TESS (Transcription Element Search System)デデタベスによスによ転転 write factors <e:1> in combination with を to confirm を, TaqMan method を utilize たたReal-time quantitative PCR による発 parsing, purpose now の SNP を contains したルシフェラーゼアッセイによるプロモーター active parsing, SNP を containing むゲノム DNA とタンパクとの combining を confirm する Electrophoretic Mobility Shift Assay(EMSA) <s:1> laboratory を line った. At the same time the first Xa に coagulation factor activity の beg の検ために, the underlying molecular および ATIII, フォンダパリヌクスを, Xa, 発 color matrix at the same time にインキュベートし, determination of absorbance して matrix decomposition を quantitative した. また planning write activity に masato even する areas outside の SNP の occasions には posthumous son 伝 polymorphism に dependent する when shi set で take している B cell line の mRNA - different analytical line をっのた.