ノイラミニダーゼ遺伝子の導入による乳酸菌の機能改良に関する研究

导入神经氨酸酶基因改善乳酸菌功能的研究

• 批准号: 14770118
• 负责人: 桑原 知巳
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770118/
• 关键词: ノイラミニダーゼ; 乳酸菌; 免疫アジュバン; 腸管免疫; ワクチン; 腸管感染症; 遺伝子組換え; 粘膜IgA; 免疫アジュバンド; ノイラニニダーゼ; アジュバンド; IgA; コレラ毒素; 腸内細菌

Lactococcus lactis YIT2081株にClostridium perfringens, Salmonalla TypyhimuriumおよびBacteroides fragilis由来のノイラミニダーゼ遺伝子nanHを導入し、ノイラミニダーゼを産生する乳酸菌を作成した。これらのうち、最も培養上清中のノイラミニダーゼ活性が高かった菌株はC.perfringensのnanH遺伝子を導入したL.lactis YIT2081(pBCnanH1)であり、本菌株をマウスに経鼻投与すると抗原として用いた卵白アルブミンに対する糞便中の特異的IgA量がベクターコントロール群の3.4倍に上昇したことから、本菌株は粘膜アジュバントとして有用であると考えられた。しかしながら、経口接種した乳酸菌の腸管への定着率は極めて低いことが知られており、本年度はL.lactis YIT2081(pBCnanH1)の腸管への定着率を調べた。ノイラミニダーゼを産生するL.lactis YIT2081(pBCnanH1)と対照菌株であるL.lactis (pBE31)を10mlのMRS broth (Em 5ug/ml)で30℃16時間培養し、新鮮な5mlのMRS brothで再懸濁したものをそれぞれ7週齢の雄性ラット4匹に、1ml/匹の量を経口投与した。糞便は輸送用培地に採取したものを100倍と10,000倍に希釈し、TATAC(Em 20μg/ml)培地に塗布した。これを30℃で3日間培養し、コロニーを計数した。投与生菌数はL.lactis (pBE31)が1.0×10^9 CFU/ml、L.lactis YIT2081(pBCnanH1)が0.9×10^9 CFU/mlであった。各菌株の糞便中の生菌数測定の結果、両菌株とも投与8時間後までは全てのラットの糞便中から分離されたが、24時間以降では対照群の1個体にのみL.lactisが検出された。以上の結果より、ノイラミニダーゼ遺伝子の導入は、L.lactisの腸管への定着率に影響を及ぼさないことが明らかとなった。

将神经氨酸酶基因NANH衍生自裂口裂，萨尔曼拉奶酪类杂草和菌脂质，引入到乳酸乳酸菌yit2081中，以产生产生神经胺酶的乳酸细菌。 Of these, the strain with the highest neuraminidase activity in the culture supernatant was L. lactis YIT2081 (pBCnanH1), which had the nanH gene of C. perfringens, and when this strain was administered intranasally to mice, the amount of specific IgA in feces for ovalbumin used as an antigen increased to 3.4 times that of the vector control group, and this strain was considered useful as a粘膜佐剂。然而，众所周知，口服接种乳酸菌的肠定植速率极低，今年我们研究了乳酸乳杆菌YIT2081的肠道定殖速率（PBCNANH1）。在10 ml肉汤（EM 5EUG/ml）中培养神经氨酰胺酶产生的L.乳酸乳杆菌（PBCNANH1）和对照菌株L.乳杆菌（PBE31）16小时，并重悬于新鲜的5 mL MRS Broth中，以口服5 ml的MRS MRS MRS MRS MR，以使其口服到四个周年7周的男性男子。将粪便收集在运输培养基中，并稀释100次和10,000次，然后应用于TATAC（EM20μg/ml）培养基。将其在30°C进行培养3天，并计算菌落。乳酸乳杆菌（PBE31）的活细菌数为1.0×10^9 cfu/ml，乳酸乳杆菌Yit2081（PBCNANH1）的活细菌数量为0.9×10^9 Cfu/ml。由于测量了每个菌株的粪便中活细菌的数量，从所有大鼠粪便中分离出两种菌株，直到给药后8小时，但是在24小时后，仅在对照组的一个人中检测到乳酸乳杆菌。以上结果表明，神经氨酸酶基因的引入不会影响肠道中乳酸乳杆菌的定殖速率。

项目成果

K.Kuroiwa, H.Nakayama, T.Kuwahara et al.: "Augmenting effect of acetic acid for acidification on bactericidal activity of hypochlorite solution."Lett.Appl.Microbiol.. 36. 46-49 (2003)

K.Kuroiwa、H.Nakayama、T.Kuwahara 等人：“酸化乙酸对次氯酸盐溶液杀菌活性的增强作用。”Lett.Appl.Microbiol.. 36. 46-49 (2003)

Simultaneous detection of Bacteroides fragilis group species by leuB-directed PCR.

通过 leuB 引导的 PCR 同时检测脆弱拟杆菌群。

• 发表时间: 2005
• 期刊: J.Med.Invest. 52・1-2
• 作者: Masaki M.et al.;Arimochi H.et al.;Nakanishi S.et al.;Miki T.et al.
• 通讯作者: Miki T.et al.

H.Shibata, C.Shirakata, H.Kawasaki, Y.Sato, T.Kuwahara et al.: "Flavone markedly affects phenotypic expression of β-lactam resistance in methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains isolated clinically."Biol.Pharm.Bull.. 26. 1478-1483 (2003)

H. Shibata、C. Shirakata、H. Kawasaki、Y. Sato、T. Kuwahara 等人：“黄酮显着影响临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株中 β-内酰胺耐药性的表型表达。”Biol.Pharm.Bull .. 26. 1478-1483 (2003)

Kuwahara, T., et al.: "Physical and genetic map of the Bacteroides fragilis YCH46 chromosome"FEMS Microbiol. Lett.. 207. 193-197 (2002)

Kuwahara, T. 等人：“脆弱拟杆菌 YCH46 染色体的物理和遗传图谱”FEMS Microbiol。

Y.Ogata, M.Nishi, H.Nakayama, T.Kuwahara et al.: "Role of bile in intestinal barrier function and its inhibitory effect on bacterial translocation in obstructive jaundice in rats."J.Surg.Res.. 115. 18-23 (2003)

Y.Ogata、M.Nishi、H.Nakayama、T.Kuwahara 等人：“胆汁在肠道屏障功能中的作用及其对大鼠阻塞性黄疸细菌移位的抑制作用。”J.Surg.Res. 115。