新規NF-κB制御因子IκB-ζの発現誘導機構

新型NF-κB调节因子IκB-ζ的表达诱导机制

• 批准号: 14780493
• 负责人: 山崎 創
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780493/
• 关键词: 遺伝子発現調節; 炎症; 自然免疫

申請者らが同定した新規因子IκB-ζは、LPSなどの微生物由来成分やIL-1βの刺激によりその発現が誘導されるが、これらと同様の遺伝子群の発現を誘導することが古くから知られているTNF-αの刺激ではほとんど誘導されない。阻害剤を用いた実験とレポーター解析により、IκB-ζの誘導には転写因子NF-κBが必要であることを明らかにしている。まず、この発現の刺激特異性が転写レベルであることを予想して、IκB-ζ遺伝子の転写開始点近傍の最長約11kbpをもつ種々のゲノム断片をルシフェラーゼレポーターの上流に導入してプロモーター解析を行なったが、IκB-ζの発現に見られる刺激特異性は認められなかった。そこで、上記の刺激による転写誘導を核ラン・オン解析(nuclear run-on assay)により評価したところ、IκB-ζの転写は、すべての刺激により同様に誘導されたので、その刺激特異性は転写レベルで決定されているのではないことが明らかになった。そこで、以下の方法により、転写後のIκB-ζmRNAの安定性を検討した。未刺激の細胞においてIκB-ζの発現はほとんど認められないので、構成的にIκB-ζmRNA全長を発現する細胞株を構築し、この細胞を転写阻害剤であるアクチノマイシンDで処理し、その分解速度を検討した。アクチノマイシンD処理時に同時にLPSやIL-1βで刺激した場合にのみ特異的にIκB-ζmRNAの安定化が観察された。

The applicant determined that the new factor IκB-κ was induced by stimulation of IL-1β, a microbially derived component of LPS, and by induction of production of TNF-α, a component of LPS. The factor NF-κB is necessary for the induction of IκB-κ. The stimulus-specificity of the IκB-zeta gene is estimated to be about 11kbp long near the start point of the gene sequence. The upstream introduction of the gene fragment is analyzed and the stimulus-specificity of the I κ B-zeta gene is estimated. In addition to the above, the stimulation induced by the nuclear run-on assay is evaluated by the nuclear run-on assay, and the IκB-induced by the nuclear run-on assay is determined by the stimulus-specific assay. The following methods were used to investigate the stability of IκB-κ mRNA after transcription. The expression of Iκ B-zeta in unstimulated cells was investigated by constructing cell lines that express the full length of IκB-zeta mRNA, and examining the rate of degradation of these cells. In addition, IL-1β was stimulated by LPS simultaneously, and the stabilization of IκB-κ mRNA was also observed in some cases.

项目成果

Nomura, S. et al.: "Purification and Characterization of Human Soluble CD14 Expressed in Picha pastris"Protein Expres. Purif.. (in press).

Nomura, S. 等人：“Picha Pastris 中表达的人可溶性 CD14 的纯化和表征”蛋白质表达。

S.Nomura et al.: "Purification and Characterization of Human Soluble CD14 Expressed in Pichia pastoris"Protein Expr.Purif.. 28・2. 310-320 (2003)

S.Nomura 等：“毕赤酵母中表达的人可溶性 CD14 的纯化和表征”Protein Expr.Purif.. 28・2 (2003)。

Kataoka, K. et al.: "Activation of macrophages by linear (1->3)-β-D-glucans. Impliations for the recognition of fungi by innate immunity"Journal of Biological Chemstry. 277. 36825-36831 (2002)

Kataoka, K. 等人：“线性 (1->3)-β-D-葡聚糖激活巨噬细胞。对先天免疫识别真菌的影响”生物化学杂志 277. 36825-36831 (2002)

T.Muta et al.: "IκB-ζ,a New Anti-Inflammatory Nuclear Protein Induced by Lipopolysaccharide, Is a Negative Regulator for Nuclear Factor-κB"J.Endotoxin Res.. 9・3. 187-191 (2003)

T. Muta 等人：“IκB-ζ，一种由脂多糖诱导的新型抗炎核蛋白，是核因子-κB 的负调节剂”J. Endotoxin Res. 9・3 (2003)。

Eto, A.et al.: "Essential roles for NE-κB and a Toll/IL-1 receptor domain-specific signal(s) in the induction of IκB-ζ"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 301. 495-501 (2003)

Eto, A. 等人：“NE-κB 和 Toll/IL-1 受体域特异性信号在 IκB-ζ 诱导中的重要作用”Biochem. Commun. 301. 495 -501 (2003)