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微少流路系を用いた電気泳動と質量分析のインターフェイスによる高能率なタンパク質解析法に関する研究

利用微通道系统的电泳和质谱之间的接口研究高效蛋白质分析方法

基本信息

批准号：
03F00078
负责人：
真鍋敬
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

電気泳動と質量分析のインターフェイスを考案するための基礎研究として、ヒト血漿タンパク質中の微量タンパク質を対象とし、現在広く用いられている電気泳動ゲルからのタンパク質/ペプチド抽出法と、引き続く質量分析法の最適化を行った。電気泳動法としては、研究代表者らが開発した非変性条件および変性条件のミクロ2次元ゲル電気泳動を用いた。その結果、現在の方法では、電気泳動終了後質量分析(マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析計MALDI-TOFMSによるペプチドマスフィンガープリント法およびエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析計(ESI-MS/MS)による部分アミノ酸配列決定法)を行うまでに多くの手操作のステップがあり、これらを自動化するには電気泳動の段階でできるだけゲルを使用しない方法の開発が必要と考えられる。血漿タンパク質を2次元ゲル電気泳動後質量分析によって解析するプロジェクトとしては、(1)2次元電気泳動条件の組み合わせによって検出されたヒト血漿微量タンパク質群の構造解析、(2)2次元電気泳動ゲル上のタンパク質のアルカリ溶液による直接抽出と質量測定、(3)2次元電気泳動ゲルからタンパク質をアルカリ抽出する際のペプチド結合切断部位の解明、に取り組んだ。また、(4)ヒト血漿を直接MALDI-TOFMSにかけるだけでも、いくつかの血漿タンパク質がイオン化され同定可能であることを見出した。これらの成果は、順次投稿準備中である。

Basic Research on Electrophoresis and Mass Analysis of Microamounts in Plasma Mass Analysis and Optimization of Electrophoresis and Mass Analysis Methods The electrokinetic method is used to study the non-linear conditions and the linear conditions. Results, Methods, and Quality Analysis after Electrophoresis (MALDI-TOFMS)(MALDI-TOFMS) The development of the method is necessary for the automation of electrokinetic processes. Mass analysis of plasma after two-dimensional electrokinetic analysis;(1) composition of two-dimensional electrokinetic conditions;(2) direct extraction mass measurement of plasma after two-dimensional electrokinetic analysis;(3)2-D electrokinetic analysis: the selection of the cutting position and the selection of the cutting position. (4) The plasma is directly MALDI-TOFMS.これらの成果は、顺次投稿准备中である。