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2次元電気泳動法による特定遺伝子欠失変異株の遺伝子発現パターンの網羅的解析

利用二维电泳综合分析特定基因缺失突变体的基因表达模式

基本信息

批准号：
11149222
负责人：
中山建男
金额：
$ 1.79万
依托单位：
宮崎医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)増殖期の枯草菌タンパク質の2D-PAGE上のクマジーポジティブスポットの中、約300個を固定した。グルコース添加条件下で消失した約40個のスポットのアミノ酸配列を決定した。これらの多くはカタボライト応答シス配列を有し、グルコースによるカタボライトレプレッション(CR)を受けるタンパク質である可能性が示唆された。既知遺伝子のほかにSucC,SucDやArginine utilizationに関与するRocA,RocD,RocFなどもグルコースによるCRを受けることが初めて明らかに出来た。2)枯草菌スポアの熱抵抗性などはスポア形成後期に合成される約20種のコートタンパク質がスポアコートを形成することで獲得される。yabG遺伝子は母細胞のSigK依存プロモーターを持ち、T_4から発現する。yabG遺伝子の機能をその欠失変異株を作成して解析した。この変異株は野生株とほぼ同様の熱、クロロホルム、リゾチーム抵抗性を示すスポアを形成した。yabG破壊株と野生株のスポアからSDSと2-ME存在下で蛋白質を可溶化しSDS-PAGEで分析した。可溶化された蛋白質にかなりの違いが認められた。yabG破壊株から特異的に得られたバンドのアミノ酸配列を決定した結果、野生株スポアからは可溶化されないSpoIVA,YrbA,YxeE,YeeK,CotTなどが含まれていた。野生株のSpoIVA,YrbA,CotTの各蛋白質はスポア成熟に伴って、SDS/2-MEに対して難溶性になるが、yabG破壊株スポアでは可溶性のまま存在することが確認され、yabG蛋白質は様々なスポア蛋白質を架橋することによって、難溶化に関与していることを示唆している。

1) About 300 of the 2D-PAGE strains of Bacillus subtilis at the growth stage were immobilized. About 40 samples were added to determine the acid composition. This is the first time that a person has ever had the opportunity to change his or her mind. It is known that RocA,RocD,RocF and Arginine utilization are related to each other. 2)About 20 species of Bacillus subtilis were synthesized in the late stage of its formation. YabG progeny is dependent on the SigK of the mother cell. YabG's function is to analyze the difference between the two. These plants are resistant to heat, humidity, and heat from wild plants. Proteins from yabG mutant strains and wild strains were solubilized in the presence of SDS and 2-ME and analyzed by SDS-PAGE. Soluble protein is the most important protein in the body. YabG, YrbA, YxeE, YeeK,CotT, YrbA, YxeE, YeeK,CotT,YrbA,YxeE,YeeK,YeeK. Wild SpoIVA,YrbA,CotT proteins were found to be soluble, soluble, insoluble, soluble, soluble,