2次元電気泳動法による特定遺伝子欠失変異株の遺伝子産物のマッピングと構造決定

使用二维电泳对特定基因缺失突变体的基因产物进行定位和结构测定

• 批准号: 10168223
• 负责人: 中山 建男
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: 宮崎医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10168223/
• 关键词: 枯草菌; 2次元電気泳動; 特定遺伝子欠失変異株; カタボライトレプレッション; 胞子; 発芽

1) 枯草菌蛋白質の発現プロファイルの標準パターンに関する成果は以下の通りである。2次元電気泳動後、メンブレンにブロットしてクマジーで染色し、数100個のポジティブスポットを認めた。アミノ酸配列は、直接、N-末端から決定し、ゲノムデータベースでマッチングを調べた。現在、約180個の同定を終了している。さらに、10数個の表層蛋白質の候補を同定することが出来た。これらのほとんどはN-末端ペプチドが切断されていた。また、スポアを可溶化し、SDS-PAGEで分画し、新たに約10個のスポア蛋白質を同定することが出来た。2) 環境変化に伴って変動する遺伝子(産物)に関する成果は以下の通りである。コントロールおよびグルコース添加の条件下で蛋白質を調製し、2D-PAGE後、エレクトロブロットした。グルコース添加の条件下で消失した約20個のスポットのアミノ酸配列を解析した。これらのほとんどはcre sequenceを有し、グルコースによるカタボライトレプレッション(CR)を受ける蛋白質であることが明らかになった。この中には、既知遺伝子のほかに新たにCRを受ける遺伝子も含まれていた。3) 特定遺伝子を破壊した変異株の解析に関する成果は次の通りである。遺伝子変異修復系の因子であるmfd蛋白質はスポア後期に影響を与える。この欠失変異株のスポアから野生株と比べて容易に抽出出来る数個の蛋白質を同定した。スポア形成T_4からSigK依存的に発現するyabG破壊株はL-Alaに対する発芽応答が低下する。野生株と比べてこの変異株のスポアから約10個のスポアコート蛋白質が容易に可溶化された。したがって、yabGはスポア蛋白質を架橋する酵素かあるいは架橋酵素の基質である可能性がある。

1) The protein of Bacillus subtilis is プロファ, the <s:1> standard is パタ, the <s:1> is に, に is に, and the する results are <e:1>. The following is the <s:1> general に である. Two yuan electric 気 after swimming, メ ン ブ レ ン に ブ ロ ッ ト し て ク マ ジ ー で dyeing し, number 100 の ポ ジ テ ィ ブ ス ポ ッ ト を recognize め た. ア ミ ノ acid with column は, direct and N - terminal か ら decided し, ゲ ノ ム デ ー タ ベ ー ス で マ ッ チ ン グ を adjustable べ た. Now, about 180 を have ended with て て る る. Youdaoplaceholder0, a dozen or so <s:1> surface protein <e:1> candidates を are determined to する とが とが out た. The N- end ペプチドが is cut off されて た た た. ま た, ス ポ ア を solubilization し, sds-page で painting し, new た に about 10 の ス ポ を ア proteins might be す る こ と が た. 2) Environmental changes に accompanied by って are related to する residues 伝 (products)に and する results <e:1>. The following are all である である. コ ン ト ロ ー ル お よ び グ ル コ ー ス added under the condition of の で protein を modulation し, 2 d - after PAGE, エ レ ク ト ロ ブ ロ ッ ト し た. グ ル コ ー ス disappear under the condition of adding の で し た about 20 の ス ポ ッ ト の ア ミ ノ acid with column を parsing し た. こ れ ら の ほ と ん ど は cre sequence を し, グ ル コ ー ス に よ る カ タ ボ ラ イ ト レ プ レ ッ シ ョ ン (CR) を け る protein で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. In こ の に は, already know but 伝 の ほ か に new た に CR を by け る heritage 伝 son も containing ま れ て い た. 3) The specific derivative 伝 offspring を breaks through the 壊 <s:1> た variant of different strains, <s:1> analyzes the に relationship, する results, <s:1> secondary, <s:1> general, である である. The 伝 sub-mutation repair system <s:1> factor であるmfd protein スポア スポア later に effect を and える. The wild strain と is more likely than べて to に extract る several <s:1> proteins を and simultaneously identify た. ス ポ ア form T_4 か ら SigK dependent に 発 now す る yabG broken 壊 strains は L - Ala に す seaborne る 発 bud 応 a low が す る. Wild strains と than べ て こ の - different strains の ス ポ ア か ら about 10 の ス ポ ア コ ー ト protein が easy に solubilization さ れ た. Youdaoplaceholder5 たがって, yabG スポア スポア protein を bridging する enzyme する ある がある <s:1> bridging enzyme <s:1> matrix である possibility がある.