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2次元電気泳動法による特定遺伝子欠失変異株の遺伝子産物のマッピングと構造決定

使用二维电泳对特定基因缺失突变体的基因产物进行定位和结构测定

基本信息

批准号：
10168223
负责人：
中山建男
金额：
$ 2.43万
依托单位：
宮崎医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1) 枯草菌蛋白質の発現プロファイルの標準パターンに関する成果は以下の通りである。2次元電気泳動後、メンブレンにブロットしてクマジーで染色し、数100個のポジティブスポットを認めた。アミノ酸配列は、直接、N-末端から決定し、ゲノムデータベースでマッチングを調べた。現在、約180個の同定を終了している。さらに、10数個の表層蛋白質の候補を同定することが出来た。これらのほとんどはN-末端ペプチドが切断されていた。また、スポアを可溶化し、SDS-PAGEで分画し、新たに約10個のスポア蛋白質を同定することが出来た。2) 環境変化に伴って変動する遺伝子(産物)に関する成果は以下の通りである。コントロールおよびグルコース添加の条件下で蛋白質を調製し、2D-PAGE後、エレクトロブロットした。グルコース添加の条件下で消失した約20個のスポットのアミノ酸配列を解析した。これらのほとんどはcre sequenceを有し、グルコースによるカタボライトレプレッション(CR)を受ける蛋白質であることが明らかになった。この中には、既知遺伝子のほかに新たにCRを受ける遺伝子も含まれていた。3) 特定遺伝子を破壊した変異株の解析に関する成果は次の通りである。遺伝子変異修復系の因子であるmfd蛋白質はスポア後期に影響を与える。この欠失変異株のスポアから野生株と比べて容易に抽出出来る数個の蛋白質を同定した。スポア形成T_4からSigK依存的に発現するyabG破壊株はL-Alaに対する発芽応答が低下する。野生株と比べてこの変異株のスポアから約10個のスポアコート蛋白質が容易に可溶化された。したがって、yabGはスポア蛋白質を架橋する酵素かあるいは架橋酵素の基質である可能性がある。

1)Subtilian protein development criteria are as follows: After 2-dimensional electrical swimming, the number of colors is 100. The acid sequence is determined by direct, N-terminal, and modulation. Now, about 180 of them have been finalized. In addition, more than 10 surface protein candidates were identified. The N-terminal terminal is cut off. About 10 proteins were identified by SDS-PAGE. 2)The results of environmental change are as follows Under the condition of adding protein, the protein was modulated by 2D-PAGE. About 20 samples were analyzed under the condition of addition. The sequence of the protein sequence is different from that of the protein sequence of the protein sequence. This is the first time that we've heard of this. 3)The results of the analysis of specific genes are related to the analysis of different plants. Mfd protein is the most important factor in gene mutation repair system. The missing mutant is easier to extract than the wild one, and several proteins are identified. The development of T_4-SigK-dependent plants is low in the development of L-Ala-dependent plants. Wild strains are more soluble than mutant strains, about 10 of which are soluble. The possibility of a protein bridging enzyme