2次元電気泳動法による特定遺伝子欠失変異株の遺伝子産物のマッピングと構造決定

使用二维电泳对特定基因缺失突变体的基因产物进行定位和结构测定

• 批准号: 09272220
• 负责人: 中山 建男
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: 宮崎医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09272220/
• 关键词: 枯草菌; 2次元電気泳動; 蛋白質パターン; カタボライトプレッション; 2成分制御系; アミノ酸配列

1)2次元電気泳動の1次元目の等電点電気泳動は、Immobilineゲル(pH4-7L,18cm)、2次元目のSDS-PAGEはExcelGel XL SDSゲル(pH12-14)で行ない、PVDFメンブレンフィルターにエレクトロブロットし、クマジ-ブルー染色し、約400個のポジティブスポットが確認された。アミノ酸配列決定は気相シーケンサ(Procise492,Applied Biosystems Division,Perkin Elmer)で、等電点の低いほうから順次、系統的な解析を行なっている。現在、約100個の分析を終了している。2)胞子形成期のステージT_2の全蛋白質を2D-PAGE後、メンブレンにエレクトロブロットし、約500個のスポットが検出された。この中で、かなりのスポットは、T_2特異的な蛋白質と思われる。3)グルコース添加の条件下で大量の蛋白質を調製し、2D-PAGE後、エレクトロブロットし、染色した。コントロールと比較して、新たに出現した18個のスポットのアミノ酸配列を解析した結果、グルコースによるカタボライト・レプレッションを受ける既知遺伝子の確認が出来ると共に、異なる代謝経路に関与する幾つかの新たな遺伝子(群)がグルコースでのカタボライト・レプレッションを受けることが明らかになった。4)2成分制御の1つのレギュレーター蛋白質の過剰生産株、アミノ酸置換株の全蛋白質を野生株のそれと比較し、新たに出現した約30個のスポットのアミノ酸配列決定を行なった。これらのほとんどは、レギュレーター蛋白質で制御されることがわかった。

1) Two-dimensional electrokinetic flow <s:1> one-dimensional order <s:1> isoelectric point electrokinetic flow, Immobilineゲ ゲ (ph 4-7l,18cm), two-dimensional order <s:1> SDS-PAGE ゲ ExcelGel XL SDS ゲ ル line (pH12-14) で な い, PVDF メ ン ブ レ ン フ ィ ル タ ー に エ レ ク ト ロ ブ ロ ッ ト し, ク マ ジ - ブ ル ー dyeing し, about 400 の ポ ジ テ ィ ブ ス ポ ッ ト が confirm さ れ た. ア ミ ノ acid with column decided は 気 phase シ ー ケ ン サ (Procise492, Applied Biosystems Division, Perkin Elmer) で, isoelectric point, low の い ほ う か ら progressive and systematic analytical line を な な っ て い る. Now, about 100 <s:1> analyses を have concluded that て る る る. 2) spore formation の ス テ ー ジ T_2 の total protein を 2 d - after PAGE, メ ン ブ レ ン に エ レ ク ト ロ ブ ロ ッ ト し, about 500 の ス ポ ッ ト が 検 out さ れ た. The で, な な, スポット スポット, and t_2-specific な proteins と think われる in <s:1> われる. 3) グ ル コ ー ス で の large amounts of protein under the condition of adding の を modulation し, 2 d - after PAGE, エ レ ク ト ロ ブ ロ ッ ト し, dyeing し た. コ ン ト ロ ー ル と compare し て, new た に appear し た 18 の ス ポ ッ ト の ア ミ ノ acid with column を parsing し た results, グ ル コ ー ス に よ る カ タ ボ ラ イ ト · レ プ レ ッ シ ョ ン を by け る son already know but 伝 の confirm が out る と に, different な る metabolic 経 road に masato and す る several つ か の new た な heritage 伝 child (group) が グ ル コ ー ス で の カ タ ボ Youdaoplaceholder0 ト · レプレッショ を を by ける とが とが とが and ら になった になった. 4) 2 ingredients suppression の 1 つ の レ ギ ュ レ ー タ ー protein の turning production plant, ア ミ ノ acid replacement seedlings の の whole protein を wild そ れ と し, new た に appear し た about 30 の ス ポ ッ ト の ア ミ ノ acid with column line decision を な っ た. こ れ ら の ほ と ん ど は, レ ギ ュ レ ー タ ー protein で suppression さ れ る こ と が わ か っ た.

项目成果

Takami,T.and Nakayama,T.: "A single copy of linker H1 genes is enough for proliferation of the DT40 chicken B cell line, and linker H1 variants participates in regulation of gene expression" Genes to Cells. 2・11. 711-723 (1997)

Takami, T. 和 Nakayama, T.：“连接子 H1 基因的单个拷贝足以使 DT40 鸡 B 细胞系增殖，并且连接子 H1 变体参与基因表达的调节”Genes to Cells 2·11。 -723 (1997)

Takami, Y. and Nakayama, T.: "One allele of the major histone gene cluster is enough for cell proliferation of the DT40 chicken B cell line."Biochim. Biophys. Acta. 1354. 105-115 (1997)

Takami, Y. 和 Nakayama, T.：“主要组蛋白基因簇的一个等位基因足以使 DT40 鸡 B 细胞系的细胞增殖。”Biochim。

Takami,Y., Takeda,S. and Nakayama,T.: "An approximately half set of histone genes is enough for cell proliferation and a lack of several histone variants causes protei pattern changes in the DT40 chicken B cell line" J.Moll.Biol.265. 394-408 (1997)

高见，Y.，武田，S.