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2次元電気泳動法による特定遺伝子欠失変異株の遺伝子産物のマッピングと構造決定

使用二维电泳对特定基因缺失突变体的基因产物进行定位和结构测定

基本信息

批准号：
09272220
负责人：
中山建男
金额：
$ 2.43万
依托单位：
宮崎医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)2次元電気泳動の1次元目の等電点電気泳動は、Immobilineゲル(pH4-7L,18cm)、2次元目のSDS-PAGEはExcelGel XL SDSゲル(pH12-14)で行ない、PVDFメンブレンフィルターにエレクトロブロットし、クマジ-ブルー染色し、約400個のポジティブスポットが確認された。アミノ酸配列決定は気相シーケンサ(Procise492,Applied Biosystems Division,Perkin Elmer)で、等電点の低いほうから順次、系統的な解析を行なっている。現在、約100個の分析を終了している。2)胞子形成期のステージT_2の全蛋白質を2D-PAGE後、メンブレンにエレクトロブロットし、約500個のスポットが検出された。この中で、かなりのスポットは、T_2特異的な蛋白質と思われる。3)グルコース添加の条件下で大量の蛋白質を調製し、2D-PAGE後、エレクトロブロットし、染色した。コントロールと比較して、新たに出現した18個のスポットのアミノ酸配列を解析した結果、グルコースによるカタボライト・レプレッションを受ける既知遺伝子の確認が出来ると共に、異なる代謝経路に関与する幾つかの新たな遺伝子(群)がグルコースでのカタボライト・レプレッションを受けることが明らかになった。4)2成分制御の1つのレギュレーター蛋白質の過剰生産株、アミノ酸置換株の全蛋白質を野生株のそれと比較し、新たに出現した約30個のスポットのアミノ酸配列決定を行なった。これらのほとんどは、レギュレーター蛋白質で制御されることがわかった。

1) two-dimensional swimming, one-dimensional electrophoretic swimming, Immobiline swimming (pH4-7L, 18cm), two-dimensional SDS-PAGE swimming (pH12-14), two-dimensional swimming, one-dimensional electrophoresis, one-dimensional swimming, one-dimensional swimming, one-dimensional electrophoresis, one-dimensional swimming, one-dimensional electrophoresis, one-dimensional swimming, one-dimensional electrophoresis, one-dimensional swimming, one-dimensional electrophoresis, one-dimensional swimming, one-dimensional electrophoresis, one-dimensional swimming, one-dimensional electrophoretic swimming, one-dimensional electrophoretic swimming, two-dimensional ExcelGel XL SDS swimming (pH12-14), two-dimensional swimming, one-dimensional electrophoretic swimming, one-dimensional swimming, one-dimensional electrophoretic swimming, one-dimensional swimming, one-dimensional electrophoretic swimming, one-dimensional swimming, one- The configuration of the acid determines the temperature response (Procise492,Applied Biosystems Division,Perkin Elmer) of the phase, the low temperature of the isoelectric point, and the analysis of the system. At present, about 100 analyses have been conducted. 2) in the period of cell formation, T _ 2 whole protein 2D-PAGE was used, and then the whole protein of T _ 2 was isolated. In the middle, in the middle. 3) under the condition of adding a large amount of protein, after 2D-PAGE, the protein was stained and stained. This is the first time to compare the results of the 18-year-old training program, the new one, the results of the analysis of the results, the results of the comparison, the results of the comparison, the results of the analysis, the results of the comparison, the results of the comparison, the results of the analysis, the results of the comparison, the results of the comparison, the results of the analysis, the results of the comparison, the results of the comparison, the results of the analysis, the results of the comparison, the results of the comparison, the results of the training, and the results of the training. Please tell me that the new child (group) is not the only one in the world, and that you will receive it. 4) (2) the composition control: 1. The total protein of the whole protein strain was compared with that of the wild strain, and about 30 of the new strains were found to be determined by the allocation of acid. I don't know. I don't know.