2次元電気泳動法による特定遺伝子欠失変異株の遺伝子産物のマッピング

使用二维电泳绘制特定基因缺失突变体的基因产物图谱

• 批准号: 08283219
• 负责人: 中山 建男
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: 宮崎医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08283219/
• 关键词: 2次元電気泳動法; 枯草菌; 蛋白質パターン; 遺伝子欠失変異株; アミノ酸配列

本年度の本研究課題の成果としては、以下のことが明らかに出来た。●特定遺伝子を欠失した多数の枯草菌変異株の蛋白質を系統的に分析し、変化した産物を特定するための2D-PAGEの装置として、ファルマシア社のMultiphorIIで最も高い再現性が得られることがわかった。●赤い再現性を得るためには、1次元および2次元ゲルともプレキャストゲルが有効であった。●枯草菌の蛋白質は、全体的に狭いpH範囲に集中しており、1次元ゲルはpH4-7の使用が有効であった。●上記pH範囲からずれる蛋白質はpH4-6,pH6-10ゲルを用いて分析が可能であった。微量蛋白質を同定するため、高感度の銀染色法が有効であった。●幾つかのDNA結合蛋白質欠失変異株を用いて予備的に分析した結果、2D-PAGEで蛋白質スポットの変化が認められた。●2D-PAGE後、メンブレンにエレクトロブロットし、幾つかの蛋白質スポットのアミン酸配列を気相シーケンサを用いて決定したところ、かなり微量でも可能であることが明らかになった。

The results of this research project this year are listed below. ●Analysis of proteins and proteins from multiple strains of Bacillus subtilis that have been genetically modified and their products are specific 2D- PAGE's device is the best, and the Multiphor II of the company is the best reproducibility. ●Aka's reproducible performance, 1-dimensional performance, 2-dimensional performance, and 1-dimensional performance. ●The protein of Bacillus subtilis, the overall narrow range of pH range and concentration, and the effective use of 1-dimensional pH of 4-7. ●The pH range mentioned above is pH 4-6, pH 6-10, and protein analysis is possible. Trace amounts of protein are determined by the same method, and the high-sensitivity silver staining method is effective. ●The results of several DNA-binding protein-binding assays of different strains were prepared by the company, and the results of 2D-PAGE and protein-binding assays were confirmed. ●After 2D-PAGE, メンブレンにエレクトロブロットし, a few つかのprotein スポットのアミン acid preparation List of を気phase シーケンサを Use いて to decide したところ, かなり Trace amount of でもpossible であることが明らかになった.

项目成果

Takami et al.: "Organization of the chicken histone genes in a major gene cluster and generation of an almost complete set of the core histone protein sequences" DNA Res.3. 95-99 (1996)

Takami 等人：“鸡组蛋白基因在主要基因簇中的组织和几乎完整的核心组蛋白序列集的生成”DNA Res.3。

Takami et al.: "An approximately half set of histone genes is enough for cell proliferation and a lack of several histone variants causes protein paterns in the DT40 chicken B cell line" J.Mol.Biol.265. 394-408 (1997)

Takami 等人：“大约一半的组蛋白基因足以进行细胞增殖，并且缺乏几种组蛋白变体会导致 DT40 鸡 B 细胞系中的蛋白质模式”J.Mol.Biol.265。