軟骨由来多機能成長因子CTGFの遺伝子発現、及び血管新生作用機序の解明

软骨源性多功能生长因子CTGF基因表达及血管生成机制的阐明

• 批准号: 03J02538
• 负责人: 近藤 誠二
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J02538/
• 关键词: 低酸素; 転写後調節; mRNA安定性; CCNファミリー; 結合組織成長因子(CTGF); 遺伝子発現; 3'-UTR; 軟骨肉腫; mRNA; 血管新生

結合組織成長因子CTGF/CCN2がある種の癌細胞に高発現していることに着目し、その遺伝子発現制御機構と血管新生作用を結び付けた癌細胞の低酸素暴露実験を行ってきた。そしてHCS-2/8において低酸素状態がctgf/ccn2 mRNAを誘導し、その機序はmRNAの安定性の増大が重要な役割を果たしている事が明らかになった。以前ctgf/ccn2のsteady-state mRNA levelを変える責任領域が3'-UTRの上流84bpに存在し、この部分のRNA probeを作製し、低酸素下で調整した核内及び細胞質タンパク質との結合をRNAゲルシフトアッセイ及びUVクロスリンクアッセイで検討したところ、低酸素暴露した場合の結合力が増大していることを確認していた。本年度はこの84bpの断片とレポータ遺伝子のキメラ遺伝子を作製し、これを元に試験管内RNA合成を行い、通常酸素もしくは低酸素暴露した細胞から抽出した細胞質タンパク質と反応させると低酸素暴露した細胞質タンパク質と反応させたRNAの分解速度が遅くなっていることを確認した(RNA分解試験)。またこの結合タンパクを詳細に調べる為、UVクロスリンクアッセイ、ノースウェスタンを行うと84bpの領域内と核内および細胞質で低酸素下で結合力の増す、35kDaのタンパクの存在が明らかになった。現在この実験事実をもとに、この結合タンパクの同定を目指している。手法として84bpのRNA断片によるRNAアフィニティークロマトグラフィーを作製し、大量の細胞核分画を材料として特異的因子を精製した後、タンパク試料を質量分析(PMF解析)し、タンパクを同定する予定である。

Combined with tissue growth factor, CTGF/CCN2 が あ る kind の cancer high に 発 now し て い る こ と に mesh し, そ の posthumous son 伝 発 system now imperial institutions と angiogenesis effect を び pay け た cancer の low acid element exposed be 験 を line っ て き た. そ し て HCS - 2/8 に お い て low acid element state が CTGF/ccn2 mRNA induced を し, そ の machine sequence は mRNA の stability の raised big が important な "を cut fruit た し て い る matter が Ming ら か に な っ た. Previously, in the ctgf/ccn2 steady-state mRNA levelを change える responsibility domain が3'-UTR <s:1> upstream 84bpに, there were <s:1> and <s:1> part of the <s:1> RNA The probe を adjust し, under low acid element で し た in nuclei and cytoplasm び タ ン パ ク qualitative と の combining を RNA ゲ ル シ フ ト ア ッ セ イ and び UV ク ロ ス リ ン ク ア ッ セ イ で beg し 検 た と こ ろ, low acid exposure し の binding force が た occasions raised large し て い る こ と を confirm し て い た. This year は こ の 84 bp の fragment と レ ポ ー タ posthumous son 伝 の キ メ ラ heritage を son 伝 し, こ れ を yuan に test tube line を い RNA synthesis, usually acid も し く は low acid element exposed し た cells か ら spare し た cytoplasm タ ン パ ク qualitative と anti 応 さ せ る と low acid element exposed し た cytoplasm タ ン パ ク qualitative と anti 応 さ せ た RNA の decomposition speed が 遅 Youdaoplaceholder0 くなって る とを とを とを confirm た(RNA decomposition experiment). ま た こ の combining タ ン パ ク を detailed に adjustable べ る for, UV ク ロ ス リ ン ク ア ッ セ イ, ノ ー ス ウ ェ ス タ ン を line う と within 84 bp と の field nuclear お よ び cytoplasm で で binding force under low acid element の raised す, 35 kda の タ ン パ ク の is が Ming ら か に な っ た. Now the <s:1> <s:1> actual experience is the を とに とに, and the <s:1> combined with the タ パ パ <s:1> <s:1> る る る る. Gimmick と し て 84 bp の RNA fragment に よ る RNA ア フ ィ ニ テ ィ ー ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を し, considerable の nuclei points draw を material と し て specific factor を refined し た, タ ン パ ク sample analysis (PMF) し を タ ン パ ク を with fixed す る designated で あ る.

项目成果

Roles of PKC, Pl3K and JNK in multiple transduction of CCN2/CTGF signals in chondrocytes

PKC、Pl3K 和 JNK 在软骨细胞 CCN2/CTGF 信号多重转导中的作用

• 期刊: Bone (印刷中)
• 作者: Mukudai;Y. et al.;Gen Yosimichi et al.
• 通讯作者: Gen Yosimichi et al.

Regulation of chicken ccn2 gene by interaction between RNA cis-element and putative transfactor during differentiation of chondrocytes.

软骨细胞分化过程中，RNA 顺式元件和推定反式因子之间的相互作用对鸡 ccn2 基因的调节。

• 发表时间: 2005
• 期刊: J.Biol.Chem. 280(5)
• 作者: 久保田聡;滝川正春;Mukudai Y. et al.
• 通讯作者: Mukudai Y. et al.

Hypoxic regulation of stability of connective tissue growth factor/CCN2 mRNA by 3′-untranslated region interacting with a cellular protein in human chondrosarcoma cells

• DOI: 10.1038/sj.onc.1209129
• 发表时间: 2006-02-01
• 期刊: ONCOGENE
• 影响因子: 8
• 作者: Kondo, S;Kubota, S;Takigawa, M
• 通讯作者: Takigawa, M

Moritani, N.H. et al.: "Suppressive effect of overexpressed connective tissue growth factor on tumor cell growth in a human oral squamous cell carcinoma-derived cell line."Cancer Lett.. 192(2). 205-214 (2003)

Moritani, N.H. 等人：“过表达的结缔组织生长因子对人口腔鳞状细胞癌衍生细胞系中肿瘤细胞生长的抑制作用。”Cancer Lett.. 192(2)。

Nishida, T. et al.: "CTGF/Hcs24, hypertrophic chondrocyte-specific gene product, interacts with perlecan in regulating the proliferation and differentiation of chondrocytes."J.Cell.Physiol.. 196(2). 265-275 (2003)

Nishida, T. 等人：“CTGF/Hcs24，肥大软骨细胞特异性基因产物，与基底膜聚糖相互作用，调节软骨细胞的增殖和分化。”J.Cell.Physiol.. 196(2)。