胎児遺伝子治療の開発(中枢神経特異的に遺伝子・幹細胞を導入する方法の開発)

胎儿基因疗法的开发（开发将基因和干细胞特异性导入中枢神经系统的方法）

• 批准号: 03J04166
• 负责人: 遠藤 誠之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J04166/
• 关键词: 胎児; 超音波; 遺伝子導入; 幹細胞; ターゲッティング

本研究目的(1)「罹患胎児の脳にSGM(naked DNA+microbubble+Ultrasound法;Shotgun Method :SGM)を用いて直接治療用遺伝子を導入して治療する。」(2)「正常骨髄細胞から血液幹細胞を採取し、レトロウイルスベクターを用いてターゲットとするリガンドに対するレセプター遺伝子を導入し、これを罹患胎児に移植することで、移植幹細胞を高効率に脳へhomingさせて治療する。」(1)について企業と共同で集束超音波発生装置を作製した。装置による遺伝子導入効率を調べるため、in vitroの系として、各種パラメーターを変化させてマウス骨髄細胞へのGFP遺伝子導入効率を調べた。その結果、超音波強度は強く、周波数は低く、照射時間が長い方が導入効率は良かったが、細胞生存率はそれに反比例した。超音波をパルスで照射すれば細胞生存率は上がり、パルスの回数を増やすと導入効率も上がった。また、4種類のmicrobubbleでは、optisonが最も良かった。またin vivoの系で、ラット肝臓の特異的な部位へ遺伝子導入が可能かどうかを調べた。尾静脈よりluciferase遺伝子とマイクロバブルを注入し、経腹壁的にラット肝臓左葉へ集束超音波を照射すると、右葉に比べ左葉にルシフェラーゼ活性が有意に高かった。(2)についてGFPトランスジェニックマウスから骨髄細胞を採取し、どの移植経路が脳へ生着させやすいかを検討した。胎仔マウスでは、経yolk sac vessel的投与ではほとんどの細胞が肝臓へ生着し、経腹腔的投与と共に脳での生着は認めなかった。経脳室的投与では移植後1〜5日後では細胞を認めたが、14日以降では認めなかった。そこで、アダルトマウスを用いで脳障害の有無と生着しやすさの関連を調べた。脳障害があれば細胞の生着を若干認めたが、ない場合には生着は認めなかった。

Objective of this study: (1) "For patients with a 児 fetus 脳にSGM(naked DNA+microbubble+Ultrasound Method;Shotgun Method :SGM)を, direct treatment with て て, and the introduction of a 伝 seed を into the <s:1> て for treatment する." (2) "normal bone marrow cells か ら を take し blood stem cells, レ ト ロ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を with い て タ ー ゲ ッ ト と す る リ ガ ン ド に す seaborne る レ セ プ タ ー heritage 伝 を import し, こ れ を suffering from fetal where に transplantation す る こ と で, the transplanted stem cells を high working rate に 脳 へ homing さ せ て treatment す る." (1)に に に て て enterprises と jointly で cluster ultrasonic generation device を manufacturing た た. Device に よ る posthumous son 伝 import working rate を adjustable べ る た め, the in vitro の is と し て, various パ ラ メ ー タ ー を variations change さ せ て マ ウ ス bone marrow cells へ の GFP heritage 伝 son import working rate を adjustable べ た. そ の result, ultrasound intensity は く, low frequency count は く, long exposure time が い が import good working rate は か っ た が, cell survival は そ れ に inverse し た. Ultrasound を パ ル ス で irradiation す れ ば on cell survival は が り, パ ル ス の back several を raised や す と import working rate on も が っ た. Youdaoplaceholder0, 4 types of microbubbleで, optisonが is the best った った. ま た in vivo の で, ラ ッ ト routine liver の へ な parts of specific 伝 son import が may か ど う か を adjustable べ た. Tail vein よ り luciferase heritage 伝 son と マ イ ク ロ バ ブ ル を injection し, 経 abdominal wall に ラ ッ ト perforatien left hepatic lobe へ cluster ultrasound を irradiation す る と than べ left lobe and right lobe に に ル シ フ ェ ラ ー ゼ high active が intentionally に か っ た. (2) に つ い て GFP ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス か ら bone marrow cells を し, ど の transplantation 経 road が 脳 へ with さ せ や す い か を beg し 検 た. Tire tsai マ ウ ス で は, 経 yolk sac vessel cast and で は ほ と ん ど の が liver cells viscera へ with し, 経 celiac cast with と に 脳 で の with は recognize め な か っ た. 1 to 5 days after the delivery in the 脳 room and で で transplantation, the で cells を recognize めたが, and after 14 days, the で <e:1> recognize めな で った った. そ こ で, ア ダ ル ト マ ウ ス を with い で 脳 handicap of の presence of と with し や す さ の masato even を adjustable べ た. Youdaoplaceholder0 obstructing があれば cells have を of several めたが and な めたが situations have に った of めな and めな った.