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ES細胞及び骨髄細胞を利用した皮膚付属器を有する正常皮膚再生の試み

尝试利用ES细胞和骨髓细胞再生正常皮肤及皮肤附属器

基本信息

批准号：
15790579
负责人：
片岡健
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790579/
关键词：
ES細胞骨髄細胞分化誘導組織形成皮膚構成細胞細胞分画

项目摘要

1.サルES細胞から表皮及び毛嚢前駆細胞の誘導骨形成性タンパク質の一つであるBMP-4存在下でサルES細胞をPA6細胞と共培養すると、未分化上皮細胞が誘導された。さらにこの細胞を継代し表皮ケラチノサイト初代培養に用いる無血清培地(KGM)で培養すると、増殖性の表皮ケラチノサイトのマーカーであるケラチン5を発現した。この分化誘導プロトコールを用いてサルES細胞から表皮ケラチノサイトに至る分化過程を詳細に検討した。現在この結果を纏めた論文を投稿中である。毛嚢前駆細胞を誘導するため、毛嚢発生への関与が報告されているWnt-3タンパク質を大量に発現している線維芽細胞より調整したコンディションメディウムを用いて、サルES細胞を培養した。残念ながら細胞形態、発現マーカーに大きな変化を認めなかった。2.上記ES細胞由来前駆細胞を用いた組織形成上記実験で分化誘導した細胞を、シリコンチャンバーを用いた細胞移植実験系に用いた。まず未分化上皮細胞を皮膚構成細胞とともに移植したところ、皮下に腫瘤を形成した。さらにケラチン5を発現している分化細胞を同様に移植したが、移植後3週間の時点でES細胞に由来する移植細胞は確認できなかった。3.毛嚢・皮脂腺組織に分化する骨髄細胞の同定骨髄細胞から毛嚢・皮脂腺など皮膚付属器を誘導する実験を繰り返し、その再現性が確認された。また組織免疫染色法を用いて分化誘導された細胞の特性を確認した。以上の実験結果は、すでに論文報告した。骨髄細胞を濃度勾配遠心法を用いて分画し、シリコンチャンバーを用いた細胞移植実験系に用いた。皮膚構成細胞へ分化することが可能な細胞は血球系幹細胞が含まれる単核細胞画分だけでなく、むしろ通常の実験では廃棄されることの多いペレット画分に多く含まれていることが証明された。この結果に関する論文は、現在投稿中である。

1. The induction of osteogenic activity of ES cells from epidermis and hair follicle cells in the presence of BMP-4 in the co-culture of ES cells and PA6 cells. The induction of undifferentiated epithelial cells. The cells were cultured in serum-free medium (KGM) and the reproductive epidermis was cultured in serum-free medium (KGM). The differentiation process of ES cells was studied in detail. Now the results are entangled in the paper. Wnt-3 cells are produced in large quantities in vitro and cultured in vitro. The cell morphology, development and transformation of the remnant 2. In addition to the above, the ES cells are used for tissue formation and differentiation. Undifferentiated epithelial cells are transplanted into the skin and form subcutaneous tumors. The origin of the transplanted ES cells was confirmed at a time point between 5 weeks and 3 weeks after transplantation. 3. The reproducibility of hair and sebaceous gland differentiation and differentiation of bone cells from hair and sebaceous glands to skin receptors was confirmed. Tissue immunostaining was used to confirm the characteristics of differentiated cells. The above results are reported in this paper. Bone marrow cell concentration matching remote control method is used for cell transplantation. The differentiation of skin constituent cells may be demonstrated by the fact that stem cells may contain a single nucleus. The results of this paper are now in submission.