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動物細胞のDNA鎖切断修復と非相同組換えに関する逆遺伝学的解析

动物细胞中DNA链断裂修复和非同源重组的反向遗传分析

基本信息

批准号：
16790058
负责人：
足立典隆
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトNalm-6細胞およびニワトリDT40細胞を用いて,一本鎖DNA切断修復/塩基除去修復機構の解析を行った。具体的には,DT40細胞のFEN1変異株,DNAポリメラーゼβ変異株,FEN1/DNAポリメラーゼβ二重変異株の表現型解析と,Nalm-6細胞のDNAポリメラーゼβ変異株の作製と表現型解析を行った。その結果,アルキル化剤によるDNA損傷の修復においてショートパッチ経路,ロングパッチ経路がともに重要であるのに対し,酸化的損傷に対してはロングパッチ経路のみが重要であることを明らかにした。この結果は生化学的手法によっても確認できた。また,二本鎖DNA切断修復についても詳細な解析を行った。エンドジョイニング変異株の解析から,エンドジョイニング阻害によりランダムインテグレーションを抑制できることを明らかにした。さらに,本研究では,Nalm-6細胞を用いて,Rad54や,Xrcc3,Ku70,Ku80,DNA ligase III, DNA ligase IなどDNA一本鎖/二本鎖切断修復への関与が示唆される遺伝子およびp53遺伝子について,順次ジーンターゲティングを行った。また,これら遺伝子の二重変異株の作製を進めた。これら一連の変異株を利用して,トポイソメラーゼ阻害剤などの抗がん剤の細胞傷害作用を増強させる方策を考察した。また,DNAligase IV破壊株を詳しく解析した結果,ヒトとニワトリとで表現型が異なることを明らかにした。

Nalm-6 cells were used for analysis of DNA repair/gene removal mechanisms. Specifically, phenotypic analysis of FEN1 variant,DNA diversity of β variant, FEN1/DNA diversity of β variant in DT40 cells, and phenotypic analysis of DNA diversity of β variant in Nalm-6 cells were performed. As a result, DNA damage repair in the cluster of organisms is important in the community, and acidification damage is important in the community. The result is a biochemical technique to confirm the results. The DNA repair of the double lock DNA was analyzed in detail. The analysis of different plants in the field of environmental protection, environmental protection and environmental protection, etc. In the present study,Nalm-6 cells were used in vitro,Rad54,Xrcc3,Ku70,Ku80,DNA ligase III, DNA ligase I, DNA one-and two-lock cleavage repair, and DNA p53 gene repair. The production system of double heterophyte plants is advanced. This paper discusses the ways to enhance the cell injury resistance of different plants by using different methods. The results of the analysis of Aligase IV are as follows: