ニワトリDT40細胞を用いた非相同組換え機構の遺伝的解析

鸡DT40细胞非同源重组机制的遗传分析

• 批准号: 12771409
• 负责人: 足立 典隆
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12771409/
• 关键词: 非相同組換え; DT40; ジーンターゲティング; エンドジョイニング; DNAライゲース; Ku; FEN-1; DNAトポイソメラーゼ

ニワトリBリンパ細胞株DT40を用いて,非相同組換えへの関与が示唆される遺伝子の破壊株(ホモ変異株)をジーンターゲティング法により作製し,解析を行った.1.DNA ligase IV : DNA ligase IV遺伝子破壊株およびKu70遺伝子との二重破壊株の解析を引き続き行った.DNA ligase IVが,Kuに依存した非相同組換え(エンドジョイニング)の過程に必須の役割を果たしていることを明らかにした.また,これらの破壊株におけるランダムインテグレーションおよびジーンターゲティングの頻度を詳しく調べた.2.DNA ligase III:ヘテロ変異株を取得し、解析を行った.また,ホモ変異株の取得を試みるとともに,DNA ligaseIIIが細胞増殖に必須である可能性を考慮し,条件致死変異株作製を試みた.3.FEN-1:ホモ変異株を取得し,解析を行った.FEN-1はDNA複製に必須ではないが,塩基除去修復に必須であることを明らかにした.また,組換え,特にランダムインテグレーションにおけるFEN-1の役割についても調べた.さらに,DNAポリメラーゼβとの二重破壊株を作製するため,DNAポリメラーゼβ遺伝子をクローニング,導入ベクターを作製して破壊株の分離を試みた.4.DNAトポイソメラーゼ(トポ)IIα:ヘテロ変異株の解析を引き続き行った.マウスES細胞での結果と同様,ヘテロ変異株の増殖速度は野生株と変わらなかったが,VP-16やICRF-193等のトポII阻害剤に対する感受性が低下していた.また,組換え,特にランダムインテグレーションにおけるトポIIαの役割についても調べた.

DNA ligase IV : DNA ligase IV DNA ligase IV DNA ligase IV 2. DNA ligase III: DNA sequence analysis FEN-1: The acquisition and analysis of heterozygotes.FEN-1: The acquisition and analysis of heterozygotes. FEN-1: The acquisition and analysis of heterozygotes. FEN-1: The acquisition and analysis of heterozygotes. In this case, the FEN-1 is a special case of FEN-1. In addition, the DNA mixture is divided into two parts: the first part is divided into two parts: the first part is divided into three parts: the second part is divided into three parts: the first part is divided into four parts: the first part is divided into three parts: the first part is divided into four parts: the first part is divided into three parts: the first part is divided into four parts: the first part is divided into three parts: the first part is divided into four parts: the second part is divided into four parts: the first part is divided into four parts: the first part is divided into four parts: the second part is The results of ES cell culture were similar, but the growth rate of mutant plants was lower than that of wild plants, and the sensitivity of mutant II inhibitors such as VP-16 and ICRF-193 was lower. In this case, the group is replaced by the group, and the special group is replaced by the group IIα.

项目成果

Adachi, N.: "DNA ligaseIV-deficient cells are more resistant to ionizing radiation in the absence of Ku70 : Implications for DNA double-strand break repair"Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 98. 12109-12113 (2001)

Adachi, N.：“DNA 连接酶 IV 缺陷细胞在缺乏 Ku70 的情况下对电离辐射具有更强的抵抗力：对 DNA 双链断裂修复的影响”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。

Kobayashi, M.: "Decreased expression DNA topoisomerase IIα expression confers increased resistance to ICRF-193 as well as VP-16 in mouse embryonic stem cell mutants"Cancer Lett.. 166. 71-77 (2001)

Kobayashi, M.：“在小鼠胚胎干细胞突变体中，DNA 拓扑异构酶 IIα 表达的减少会增加对 ICRF-193 和 VP-16 的抵抗力”Cancer Lett.. 166. 71-77 (2001)

Kobayashi,M.: "Decreased topoisomeraseIIα expression confers increased resistance to ICRF-193 as wellas VP-16 in mouse embryonic stem cells."Cancer Letters. (印刷中).

Kobayashi, M.：“拓扑异构酶 IIα 表达的减少会增加小鼠胚胎干细胞对 ICRF-193 和 VP-16 的抵抗力。”《癌症快报》（正在出版）。