DT40細胞を用いた非相同組換え機構の遺伝的解析

使用DT40细胞进行非同源重组机制的遗传分析

• 批准号: 14771289
• 负责人: 足立 典隆
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771289/
• 关键词: DT40; 非相同組換え; ジーンターゲティング; DNA ligase; 塩基除去修復; トポイソラーゼ; トポイソメラーゼ

ニワトリBリンパ細胞株DT40を主材料に用いて,非相同組換えへの関与が示唆される遺伝子の破壊株(ホモ変異株)をジーンターゲティング法により作製し,解析を行った。1.DNA ligase IV:ホモ変異株においてランダムインテグレーション頻度が著しく低下していること,またジーンターゲティング効率が上昇していることがわかった。これらの表現型はKu変異株や二重変異株においても全く同様であった。またターゲティング効率の低い遺伝子座において特に上昇率が高かった。したがって,非相同組換え(エンドジョイニング)がランダムインテグレーションの主要機構であり,この反応を抑制することでジーンターゲティングを効率良く行える可能性が示された。一方以上の結果をもとに,ヒト細胞への応用を試みた。2.DNA ligase III:得られたヘテロ変異株を用いてホモ変異株の取得を試みた,必須遺伝子である可能性が高いため,テトラサイクリン制御系を利用した条件致死変異株の作製に着手した。3.FEN-1:ホモ変異株においてランダムインテグレーション頻度が上昇していることがわかった。これはFEN-1欠損によりゲノムが不安定になるためと考えられる。またDNAポリメラーゼβとの二重変異株の解析から,脱塩基部位の修復に関わる新規経路が存在する可能性が示唆された。4.DNAポリメラーゼβ:ホモ変異株においてランダムインテグレーション頻度が約半分に低下している可能性が示された。さらに詳細な解析を行う必要があるが,動物細胞のランダムインテグレーションに関わるDNAポリメラーゼはいまだ同定されていないため,非常に興味深い。5.DNAトポイソメラーゼII:ヘテロ変異株において抗癌剤エトポシドに対する感受性が約半分に低下していることを明らかにした。一方,DNA ligase IV変異株やKu変異株において,エトポシドに対する感受性が著しく増大していることを見い出した。DNA ligase IV変異株においてトポイソメラーゼIIをヘテロにしてもやはりエトポシド感受性は約半分に低下した。これらの結果はトポイソメラーゼII損傷修復においてエンドジョイニングが必須の役割を果たすことを示している。

The main material of the cell strain DT40 is not the same as that of the cell strain. The main material of the cell strain is not the same as that of the cell strain. 1.DNA ligase IV: I don't know what to do. I don't know. I don't know, I don't know. All of them are the same as those of the same type of Ku. The rate is low, the rate is low, the rate is high. If it is not the same as that of the same group, it should not be the same. If it is not the same as that of the same system, it should not be the same. If it is not the same as that of the same system, it should not be the same as that of the major institutions. If it is not the same as that of the same system, it should not be the same as that of the major institutions. More than one party has successfully completed the test, and the other party will use the test device. 2.DNA ligase III: if you can get the test result by using the virus strain, you must have the possibility that the possibility is high, and the royal system must use the virus condition to kill the strain to do the test. 3.FEN-1: I don't know what to do. I don't know what to do. I don't know if there is any unrest in FEN-1. "DNA", "β", "double" plant, "off the base", "repair", "new regulation" road, there is a "possibility" to indicate that there is "possibility". 4.DNA

项目成果

Adachi, N.: "Hypersensitivity of nonhomologous DNA end-joining mutants to VP-16 and ICRF-193: Implications for the repair of topoisomerase II-mediated DNA damage."J.Biol.Chem.. 278(38). 35897-35902 (2003)

Adachi, N.：“非同源 DNA 末端连接突变体对 VP-16 和 ICRF-193 的超敏性：对拓扑异构酶 II 介导的 DNA 损伤修复的影响。”J.Biol.Chem.. 278(38)。

Karanjiwala, Z.E: "The embryonic lethality in DNA ligase IV deficient mice is rescued by deletion of Ku : Implications for unifying the heterogeneous phenotypes of NHEJ mutants"DNA Repair. 1(12). 1017-1026 (2002)

Karanjiwala, Z.E：“通过删除 Ku 来挽救 DNA 连接酶 IV 缺陷小鼠的胚胎致死性：对统一 NHEJ 突变体异质表型的影响”DNA 修复。