網膜背側神経節細胞に特異的に発現する新規分泌性因子の生理機能の解析

视网膜背神经节细胞特异表达的新型分泌因子的生理功能分析

• 批准号: 05J04307
• 负责人: 山本 泰憲
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: National Institute for Basic Biology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J04307/
• 关键词: 網膜視蓋投射; 軸索ガイダンス

本研究では、網膜背側の神経節細胞で特異的に発現する新規分泌性分子の生理機能の解析を行っている。私どもは,ニワトリ網膜内における本分子の発現をshRNAにより抑制すると,背側の視神経軸索が本来とは異なる位置で枝分かれを起こすことを観察している。本分子は分泌性の蛋白質であるため,何らかの受容体を介して軸索の枝分かれを調節しているものと考えられた。そこで本年度は、本分子の受容体の同定を発現クローニング法により試みた。E14のニワトリ網膜と視蓋よりmRNAを単離し、directional cDNA libraryとrandom cDNA libraryを作成した。Directional cDNA libraryを10万クローン及び、random cDNA libraryを210万クローン、本分子とアフカリフォスファターゼまたはFcとの融合蛋白質をプローブに用いてスクリーニングしたが,受容体の単離は成功しなかった。Eph-ephrin系は視神経軸索の枝分かれの位置を調節しており、Ephが機能するためには,Ephと結合したephrinがマトリクスメタロプロテアーゼにより切断される必要があることが知られている。一方,新規分泌性因子はプロテアーゼインヒビター様のドメインを持っている。そこで、本分子がephrinの切断を制御することで,背側の視神経軸索の枝分かれの位置を調節している可能性について検討した。Neuro2A細胞にephrin-A2を発現させ,EphA3の細胞外領域とFcの融合蛋白質を培地中に添加し,マトリクスメタロプロテアーゼを活性化させた。切断されたephrin-A2の量を本分子存在下と非存在下で比較したところ、両者に優位な差は見られなかった。この結果から、本分子による視神経軸索の枝分かれの位置の調節は、ephrinの切断の制御によるものではないと考えられた。

This study aims to elucidate the physiological functions of new secretory molecules that are specifically expressed in dorsal ganglion cells of the retina. The expression of this molecule in the retina was inhibited by shRNA, and the dorsal optic axons were observed at different positions. This molecule secretes proteins, and regulates axonal branching. This year, the same method of determining the content of this molecule was developed. E14 is a direct and random cDNA library. Directional cDNA library: 100,000 copies, random cDNA library: 2,100,000 copies, this molecule: fusion protein: fusion protein. Eph-ephrin is regulated according to the position of the branches of the nervous system, and the function of Eph-ephrin is regulated according to the position of Eph-ephrin. On the one hand, the new secretory factor is the key factor to maintain the stability of the environment. The possibility of adjusting the position of the dorsal optic axons is discussed. Neuro2A cell Ephrin-A2 was discovered, EphA3 extracellular domain Fc fusion protein was added to culture, and the activity of EphA3 fusion protein was increased. The quantity of the protein is determined by the presence or absence of the protein. The result of this is that the position of the branch of the neuron axis is regulated, and the position of the branch of the neuron is controlled.