GFP遺伝子導入マウスを用いた脳の構造的性差の時・空間的構築機構の解析

利用GFP转基因小鼠分析大脑结构性别差异的时空机制

• 批准号: 16700306
• 负责人: 松田 賢一
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16700306/
• 关键词: エストロゲン; トランスジェニック; GFP; 神経内分泌; エストロゲン受容体; 性差; 性行動; 生細胞

エストロゲンの作用に伴い、脳神経細胞にどのような構造的変化がもたらされ、その結果、どのような機能的変化が生じるのかを明らかにするために、マウスエストロゲン受容体(ER)α遺伝子プロモーターの下流にGFPのcDNAを繋いだ遺伝子のTGマウスを作成した。得られたTG系統において視床下部、中隔、分界条床核や扁桃体など、ERαを発現する領域でGFP陽性の神経細胞の分布が確認された。卵巣摘除を行ったTGマウスの脳組織を解析し、卵巣摘除を行うとGFP陽性の細胞が増加する脳領域と変化の見られない領域があり、変化の見られた領域では、神経細胞体が小さくなることを明らかにした。また、GFPの蛍光は神経細胞体のみならず軸索および樹状突起にも分布しており、神経細胞の形態の観察可能であることがわかった。脳切片をERαに対する抗体で蛍光染色し、GFP陽性細胞がERαを発現している細胞であることを確認した。生後数日のTGマウスの脳を取り出し、350μmの脳スライスを作成、コラーゲンコートした多孔質膜上にのせ、膜の下面に培地が接するようにして、37℃、5%CO2で培養を行い、共焦点レーザースキャン顕微鏡を用いて1日毎に神経の形態を観察した。少なくとも10日は正常な状態で組織を培養し、GFPの蛍光を指標に神経細胞の形態を観察することができた。培養終了後、組織を固定して切片を作製、ニッスル染色を行い、神経細胞が生存していることも確認した。以上の成果を第34回北米神経科学会年会にて発表し注目を得た。さらに、Laser Capture Microdissection Systemを用いて単細胞レベルでGFP陽性神経細胞を回収し、ジーンチップ(Affimetrics)を用いてGFP陽性神経細胞に特的に発現する遺伝子の同定を行った。

In addition, the gene expression of GFP in the downstream of the receptor was also studied. The distribution of GFP positive neurons in the lower part of the optic bed, the septum, the boundary zone nucleus, the tonsil, and the ERα region was confirmed. Ovulation of TG-positive cells in the brain The distribution of GFP in the axons and dendrites of the neurons may be observed. ERα was detected by fluorescent staining and GFP positive cells were identified by fluorescent staining. A few days after birth, TG particles were extracted, 350μm particles were prepared, and the surface of the porous membrane was cultured at 37℃ and 5% CO2. The morphology of the membrane was observed by confocal microscopy. A few days later, tissue culture, GFP and light indicators were observed. After culture, tissue fixation, sectioning, staining, and confirmation of neuronal survival The above results were presented at the 34th Annual Meeting of the American Academy of Sciences. In addition, the Laser Capture Microdissection System was used to detect and identify GFP positive neurons by using Affimetrics.

项目成果

男女の脳の違い

男性和女性大脑的差异

• 发表时间: 2005
• 期刊: Hormone frontier in Gynecology 12
• 作者: Tsumori T;Yokota S;Kishi T;Qin Y;Oka T;Yasui Y.;S.Yokota;Minjuan Pei;Fang Han;河田光博
• 通讯作者: 河田光博

Transgenic expression of enhanced green fluorescent protein enables direct visualization for physioloeical studies of vasopressin neuron and isolated nerve terminals of the rat

增强型绿色荧光蛋白的转基因表达能够直接可视化大鼠加压素神经元和分离神经末梢的生理学研究

• 发表时间: 2005
• 期刊: Endocrinology 146
• 作者: Tsumori T;Yokota S;Kishi T;Qin Y;Oka T;Yasui Y.;S.Yokota;Minjuan Pei;Fang Han;河田光博;Kentaro Mori;Yoichi Ueta
• 通讯作者: Yoichi Ueta

Imaging analysis of subcellular correlation of androgen receptor and estrogen receptor α in single living cells using GFP color variants

使用 GFP 颜色变体对单个活细胞中雄激素受体和雌激素受体 α 的亚细胞相关性进行成像分析

• 发表时间: 2004
• 期刊: Molecular Endocrinology 18
• 作者: Tsumori T;Yokota S;Kishi T;Qin Y;Oka T;Yasui Y.;S.Yokota;Minjuan Pei;Fang Han;河田光博;Kentaro Mori;Yoichi Ueta;Ikuo Ochiai
• 通讯作者: Ikuo Ochiai

Visualization of glucocorticoid receptor and mineralocorticoid receptor inter-actions in living cells GFP-based fluorescence resonance energy transfer

活细胞中糖皮质激素受体和盐皮质激素受体相互作用的可视化基于 GFP 的荧光共振能量转移

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Neuroscience 24
• 作者: Tsumori T;Yokota S;Kishi T;Qin Y;Oka T;Yasui Y.;S.Yokota;Minjuan Pei;Fang Han;河田光博;Kentaro Mori;Yoichi Ueta;Ikuo Ochiai;Mayumi Nishi
• 通讯作者: Mayumi Nishi

Subcellular localization and dynamics of MysPDZ (Myo18A) in live mammalian cells.

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2004.11.058
• 发表时间: 2005-01
• 期刊: Biochemical and biophysical research communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Kentaro Mori;K. Matsuda;T. Furusawa;M. Kawata;Toshiaki Inoue;M. Obinata