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転写活性化領域における核内分子ダイナミクスの可視化

转录激活区域核分子动力学的可视化

基本信息

批准号：
18790146
负责人：
松田賢一
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790146/
关键词：
転写ステロイドホルモン GFP 人工染色体エピジェネティックス

项目摘要

ステロイドホルモン受容体(SR)を介した転写調節において,エピジェネティックな制御機構やnucleosomeのremodelingなど多数の因子が関わり合う調節機構が時空間的にどのように制御されているのかを解明する目的で,転写調節部位を可視化できる系の樹立を試みた。Lac operator配列のタンデムリピートの近傍に,SR依存的なpromoterであるMMTV-LTRにDHFR遺伝子をつないだ人工染色体コンストラクトを作成した。このコンストラクトをCHO細胞に導入し,G418薬剤耐性の細胞株を選択した。これらの細胞株にDHFR阻害剤methotrexateを徐々に濃度を上げて培地に添加し,高濃度methotrexate耐性の細胞株を取得した。この細胞株は自然発生的にMMTV-DHFRが増幅された細胞と考えられたので,実際に増幅されているかをMMTVに対するFISHで確認した。この細胞に蛍光タンパク(FP)を融合したSR,転写共役因子およびヒストン(バリアント)を発現させ,ホルモン添加に伴いFP融合SRが挿入遺伝子に多数存在するpromoter上の結合配列に結合し,蛍光の集積として転写の現場を可視化することが可能となった。この系を用いて,アンドロゲンレセプター,エストロゲンレセプター,プロゲステロンレセプター,転写共役因子(SAFB-1/2),核マトリックスタンパクの核内でのダイナミクスを解析した。

In the case of SR, the control mechanism and the remodeling of nucleosomes are related to most factors. In the case of SR, the control mechanism and the remodeling of nucleosomes are related to the adjustment mechanism. In the case of SR, the control mechanism and the remodeling of nucleosomes are related to each other. In the case of SR, the adjustment position is visualized and the system is established. Lac operator configuration is closely related to SR-dependent promoter, MMTV-LTR and DHFR gene. The cell lines G418 and G418 were introduced into CHO cells. The DHFR inhibitor methorexate was added to the culture medium at elevated concentrations, and the methorexate tolerant cell lines were obtained at elevated concentrations. These cell lines are naturally generated and confirmed by FISH. These cells are fused with FP, SR, and the co-working factor is found, and FP fusion SR is present in most of the promoters. The binding arrangement on the promoter is combined, and the accumulation of FP and the visualization of the writing site are possible. This system is used in the analysis of SAFB-1/2, which is a common factor in nuclear power generation.