機能性遺伝子探索のための一細胞の光単離法

用于功能基因搜索的单细胞光隔离方法

• 批准号: 17700417
• 负责人: 中西 淳
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: National Institute for Materials Science (2006)The Institute of Physical and Chemical Research (2005)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17700417/
• 关键词: 細胞接着; ケージド化合物; 自己組織化単分子膜; 細胞回収; 蛍光顕微鏡; アドレナリン受容体; クローニング; 官能基

本研究では,細胞を用いた遺伝子クローニングを行うべく,細胞集団の中から特定一細胞を光単離する方法の開発を目指している.本年度は,以下の研究を行った.1.細胞の光剥離法の開発金基板上に光分解性基を介して末端に活性エステルを有するチオールの単分子膜を形成させた.活性エステル基にビオチンアミンもしくはエチレングリコールモノアミンを結合させた後,縞状に光照射を行った.それぞれの基板に対し,アビジン標識ビーズおよび蛍光標識蛋白質を作用させたところ,光照射領域ではこれらのアミンが解離していることが分かった.このことから,細胞膜上のインテグリンと相互作用するRGDペプチドをアミンとして用いることで基板上に接着した細胞を光剥離できると予想され,現在その検討を行っている.2.細胞の選択的増殖法の開発光分解性基によってカルボキシル基を保護した化合物で表面修飾したガラス基板をアルブミンなどのブロッキング剤を吸着させることで,光照射領域に選択的に細胞を接着させることができる.この基板上にパターン化したHEK293細胞に対し,その周辺領域を光照射したところ,光照射依存的に細胞増殖を誘導できた.同様のことは一細胞アレイ上でも実現可能であった.1で述べた細胞剥離とは別の戦略として,狙った一細胞を選択的に増殖させ,不要な細胞の増殖を抑制することでも細胞単離が可能であると考えられ,現在,この戦略の検討を行っている.3.クローニング対象遺伝子の選別法の開発タグ配列を有するアドレナリン受容体を数種類作成し,タグ導入位置とタグを色素標識した際の蛍光応答との関係を解析した.アドレナリンに対する蛍光強度変化はタグ導入位置に大きく依存していた.このことから,任意の位置にタグを導入したライブラリーの中から,蛍光強度を指標にアドレナリンに対して高感度に応答する遺伝子を選別できることが分かった.

This study aims to develop a method for the isolation of a specific cell from a cell population by using a cell-based vector. This year, the following research was carried out: 1. Photodissociation of cells on gold substrates for the formation of photolytic groups on active terminals. After the activity of the active group, the light irradiation is carried out. In the case of light irradiation, the substrate is dissociated from the protein. The cell membrane is a membrane of the cell, and the interaction between the cell membrane and the RGD is a membrane of the cell. 2. The growth method of cell selection, the development of photolytic bases, the protection of chemical compounds, the surface modification of substrates, the adsorption of chemical compounds, and the selection of cells in the field of light irradiation. The substrate was transformed into HEK293 cells, and the peripheral regions were irradiated with light. The same is true of cell separation and differentiation. 1. Cell separation and differentiation. 2. Cell selection and proliferation. 3. Cell separation and differentiation. 4. Cell selection and proliferation. 5. Cell selection and proliferation. 6. Cell separation and differentiation. 7. Cell separation and differentiation. 8. Cell separation and differentiation. The position of the pigment is analyzed. The intensity of light varies depending on the position of the light source. Now, when you can import a grid into the radio broadcast at any location, you can select between high-sensitivity and high-sensitivity transmitters based on the light intensity index.

项目成果

ケージド細胞培養基板を用いる細胞アレイ作製

使用笼式细胞培养基质生产细胞阵列

• 发表时间: 2006
• 期刊: バイオインダストリー 23・1
• 作者: J.Nakanishi;T.Takarada;S.Yunoki;Y.Kikuchi;M.Maeda;宝田 徹
• 通讯作者: 宝田 徹

Preparation of Single-Cell Arrays on Photoactivatable Cell-Culturing Substrates

光活化细胞培养基底上单细胞阵列的制备

• 发表时间: 2006
• 期刊: Proceedings of NanoBio Tokyo 2006
• 作者: Y.Kikuchi;J.Nakanishi;T.Takarada;S.Inoue;K.Yamaguchi;M.Maeda
• 通讯作者: M.Maeda

異なる細胞を望みの位置に配置する

将不同的单元格放置在所需的位置

• 发表时间: 2005
• 期刊: Bionics 2・5
• 作者: J.Nakanishi;T.Takarada;S.Yunoki;Y.Kikuchi;M.Maeda;宝田 徹;中西 淳
• 通讯作者: 中西 淳

新規細胞アレイ作製法

新型单元阵列生产方法

• 发表时间: 2006
• 期刊: 医学のあゆみ 218
• 作者: 中西 淳;前田瑞夫
• 通讯作者: 前田瑞夫