MAPK経路制御因子Sproutyの口腔癌における増殖/転移抑制機構の解明

阐明 MAPK 通路调节剂 Sprouty 在口腔癌中的生长/转移抑制机制

• 批准号: 06J09343
• 负责人: 武富 孝治
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J09343/
• 关键词: Sprouty; Spred; SQUU-A,B; MAPK 経路; リンパ行性転移; LIVE-1; VEGF-C; MAPK; SQUU-A,B 細胞; MMP9; ELISA; MAPK経路; SQUU-A,B細胞; ERK1; 2のリン酸化; リンパ行性転換

Ras-MAPK経路は細胞増殖/分化を司る重要なシグナル伝達経路で、殊に癌においてその制御は大変重要である。今回、そのMAPK経路によって誘導されるNegative Feedback因子Sprouty/Spredの口腔癌における増殖/転移抑制機構に着目し、研究を開始した。まず、同一患者から提供された口腔扁平上皮癌細胞株SQUU-A細胞株(非転移株)とSQUU-B細胞株(転移株)におけるSproutyおよびSpredのmRNAおよびタンパク質の発現を確認した。次にこのMAPK経路で誘導されるSprouty/Spredの癌細胞における影響を調べたところ、転移傾向を有するSQUU-B細胞においてその増殖活性をSprouty/Spredは顕著に抑制した。次に口腔癌が高率にリンパ行性転移をすることが知られているため、現在、Sprouty/Spredを強制発現させた細胞における上清を用いて、リンパ管転移に関連するVEGF-C(血管上皮成長因子-C)の発現、ならびにMMP-2,9の発現をELISAを用いて測定し、癌の浸潤・転移におけるSprouty/Spredの作用について調べたところ、両者ともその発現がSprouty/Spredによって有意に抑制された。また細胞骨格に於けるSprouty/Spredの作用をwound healing assayを行ったところ、Sprouty/Spredを組み込んだSQUU-B細胞のmigrationは有意に抑制されていた。これらin vitroにおけるSprouty/Spredの作用をin vivoで調べるため、Sprouty/Spredをウイルスベクターに組み感染させたSQUU-B細胞を野生型マウスの舌縁に注入して、頸部リンパ節への転移の状態をHE染色ならびに免疫組織化学的解析を行った。その結果、Sprouty/Spredを組み込まない細胞を生着させたマウスは頸部リンパ節に転移していたのに対し、Sprouty/Spredを組み込んだSQUU-B細胞(Sprouty/Spred SQUU-B)を生着させたマウスの頸部リンパ節転移は有意に少なかった。また、注入した舌縁周囲のリンパ管新生もLIVE-1にて調べたところ、同じくSprouty/Spred SQUU-B生着マウスの方が少なかった。以上の結果より、Sprouty/Spredファミリーは、扁平上皮癌の増殖活性を抑制するとともに、宿主に於けるリンパ管新生を抑制することにより、その転移も抑制することが判明した。

RAS-MAPK途径是控制细胞增殖/分化的重要信号通路，其控制在癌症中尤为重要。我们已经开始研究，重点是由MAPK途径在口腔癌中引起的负反馈因子发芽/SPR的机制。首先，确认了同一患者提供的口服鳞状细胞癌细胞系（非转移性菌株）和Squu-B（转移性菌株）中发芽和弹簧mRNA和蛋白的表达。接下来，当我们研究该MAPK途径对癌细胞诱导的发芽/SPR的影响时，发芽/SPRS SPR显着抑制了其在Squu-B细胞中的增殖活性，并具有转移性趋势。接下来，众所周知，口服癌症以很高的速度进行淋巴转移，因此，使用ELISA测量了与淋巴转移有关的VEGF-C（血管表皮生长因子-C）和MMP-2,9的表达，使用ELISA测量了与ELISA相关的，以及对癌症入侵和肿瘤的影响，对群体的抑制作用和群体都很大。此外，当我们伤口愈合分析了发芽/SPR对细胞骨架的影响时，会显着抑制发芽/SPR的结合孢子-B细胞的迁移。为了研究体外体外/体外体外的作用，将感染了发芽/SPRE的Squu-B细胞注入了野生型小鼠的舌缘中，并进行了染色和免疫组织化学分析，以确定对宫颈淋巴结的转移状况。结果，刻有未掺入发芽/泉水的细胞的小鼠转移到宫颈淋巴结转移到宫颈淋巴结，而刻有Squu-B细胞的小鼠（Sprouty/Sprouty Spere-B）刻有Sprouty/Spruty/Spred-B细胞的刻度大大较小。此外，当在Live-1上检查舌缘周围的淋巴管生成时，在Sprouty/Spred Spem-b上刻有较少的小鼠。从上述结果中可以发现，发芽/SPR的家族抑制了鳞状细胞癌的增殖活性，并抑制宿主中的淋巴管生成，从而抑制其转移。