PFIC2治療薬の探索及び治療薬の作用機構と関連した他疾患への応用性に関する検討

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[研究目的]PFIC2は既存の胆汁うっ滞治療薬が効かず、またその病態発症機構が不明であったため、BSEPを直接ターゲットとする治療法がなく、金銭的にも肉体的にも患者に負担の多い生体肝移植しか有効な治療法がないのが現状であった。しかし、私のこれまでの研究からE297G、D482GのBSEP遺伝子変異を持つPFIC2患者では、BSEPの基質輸送能自体は正常であるが、BSEPの翻訳後の細胞膜への移行過程に異常をきたすために病態が発症することが明らかとなった(Hayashi H. Hepatology 200541(4):916-24.)。E297G、D482G変異型BSEPは、正常な基質輸送能を保持していることから、これら変異体の細胞膜への移行を促進させることは、初めてBSEPを直接ターゲットとした有効かつ簡便な治療法の確立につながり、PFIC2において生体肝移植に変わる治療法になると考えられる。[研究実績]1.PFIC2治療薬候補化合物のスクリーニング:BSEP発現MDCKII細胞を構築し、胆汁酸の経細胞輸送を評価可能な系を確立した。この評価系を用い、小胞体の糖鎖修飾酵素の阻害剤、分子シャペロンの誘導剤などのPFIC2治療薬候補化合物のスクリーニングを行った結果、欧米で尿サイクル異常症の治療薬として臨床投与が認可されている4-phenylbutyrate(4PBA)は、BSEPによる胆汁酸輸送を顕著に増加させたことから、PFIC2患者及び、他の肝内胆汁うっ滞患者に対して有用である可能性が明らかとなった。2.候補化合物のin vivoにおける効果の確認:臨床適用量の4PBAを投与したSprague-Dawleyラットを用い、放射標識胆汁酸の胆汁排泄クリアランスの算出、胆管側膜分画のウエスタンブロッティングを行った結果、4PBAはin vivoにおいてもBSEPの輸送機能及び、発現量を上昇させることが明らかとなった。このことから、4PBAはPFIC2患者及び、他の肝内胆汁うっ滞患者に対して極めて有効な可能性が高いと考えられる。3.候補化合物の作用段階の同定:Cell surfaceビオチニレーション法の、4PBAは細胞膜上のBSEP発現量を増加させ、BSEPによる細胞膜を介した輸送を増加させることが明らかとなった。