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生理活性物質の高選択的高感度検出用電気化学バイオセンサーの開発

开发用于高选择性和灵敏检测生理活性物质的电化学生物传感器

基本信息

批准号：
07F07057
负责人：
寺前紀夫
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

特定の標的物質に対して選択的に結合するアプタヤーはSELEX法による網羅的な解析から選別され、標的に対する高い選択性や親和性を有する特徴がある。アプタマーに、蛍光団や吸収団、電気化学活性団等をラベル化し、これを利用した基質特異的分析法が開発されている。本研究では脱塩基部位含有DNA二重鎖とアプタマーを組み合わせたATPのラベルフリー蛍光検出系の開発を行った。アプタマー鎖とこれに相補的な脱塩基(AP)部位含有DNA鎖からなるDNA二重鎖にナフチリジン誘導体の蛍光性リガンド(ATMND)を添加するとATMNDがAPサイトに結合し消光する。蛍光滴定実験の結果は1:1の錯生成モデルで解析でき、結合定数としてK_<11>=7.1×10^7M^<-1>を得た.この錯体にATPを添加するとアプタマー鎖とATPとの錯生成が生じ、ATMNDの蛍光が回復する。回復度にして7倍の蛍光応答を得た、蛍光の回復度によりATP存在量を分析でき、検出感度は約1μMであった。この検出感度は従来法に匹敵するか優るものであった。一方、アプタマー鎖を2分割したDNA鎖を作り、ATPとAPサイト含有DNA鎖の存在下で自己集合体が形成される系に対して、APサイト上下塩基をグアニンまたはチミンとした場合、それぞれATMNDまたはジアミノピラジン誘導体(DCPC)をリガンドとすると、消光型と発蛍光型の蛍光応答を得ることができた。ATMNDとフェロセンを結合した電気化学活性リガンドを用いた系についても検討中である。以上、脱塩基含有DNA鎖とアプタマー配列とを用いた新規分析法を開発した。

特定种类的物质不饱和度正常的聚合物聚合物，不饱和度高的非线性和非线性的非线性函数，不饱和度高的非线性函数和非线性函数都有特殊的性质。アプタマーに、蛍光団や吸収団、電気化学活性団等をラベル化し、これを利用した基質特異的分析法が開発されている。本研究将DNA双链断裂结合ATP酶抑制剂掺入光激发出系泊苷进行测序。荧光素酶抑制剂与非荧光素酶相结合的脱乙酰基（AP）部分含有DNA脱氧核糖核酸（DNA），DNA二重脱氧核糖核酸（DNA），荧光素酶体发光性荧光素酶（ATMND），加入脱氧核糖核酸（ATMND），ATMND与AP脱氧核糖核酸（AP）结合发光消失。光固化固定化产物1：1荧光生成荧光素酶解产物，复合定量荧光素酶法K_<11>=7.1×10^7M^<-1>当量，荧光体ATP加荧光素酶解产物ATP荧光生成荧光素酶，ATMND荧光还原荧光素酶解产物。回光度滴定法7倍荧光定量回答得率，荧光定量回光度滴定法要求ATP存在量分析滴定，检出灵敏度为1μM的葡萄糖。この検出感度は従来法に匹敵するか優るものであった。一方、ATP酶解2分酶解DNA作业申请、ATP酶解AP酶解含有DNA酶解存在下自身的集合体形成的酶系酶解申请、AP酶解上基酶解酶解产物。ATMND是一种新型的抗真菌药物，用于治疗幽门螺杆菌化学活性低下症。在此之上，合资基脱有DNA脱氧核糖核酸配位序列，采用新的DNA分析法进行测序。